收藏本站
《西部医学》 2008年01期
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

葡萄糖激酶基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达

郑宏庭  苏白海  方芳  
【摘要】:目的构建葡萄糖激酶(GK)基因真核表达载体并于COS-7细胞内表达,为体外构建具有葡萄糖刺激性胰岛素分泌能力的基因工程细胞奠定基础。方法质粒pCMV4-GKZ1以EcoRI、BamHI双酶切,获得GK cDNA,与同样酶切的pcDNA3.1载体连接,建成重组载体pcDNA3.1-GKZ1,经酶切与测序鉴定。Lipofectamine2000介导pcDNA3.1-GKZ1转COS-7细胞,分别以RT-PCR及Western-blot对COS-7/GKZ1细胞中GKZ1基因的转录及表达进行检测。结果构建的pcDNA3.1-GKZ1重组载体经酶切有1450 bp的GKZ1 cDNA,序列经测序证实。COS-7/GKZ1细胞RT-PCR扩增出498 bp的目的片段,Western-blot可见54 kDa的特异性条带,而COS-7/pcDNA3.1细胞上述各项检测结果均为阴性。结论成功构建GK基因真核表达载体pcDNA3.1-GKZ1,并于COS-7细胞中成功转录与表达。

手机知网App
【共引文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 郑宏庭;联合表达成熟胰岛素与葡萄糖激酶的HepG2细胞构建研究[D];重庆医科大学;2006年
2 王波;番石榴叶提取物辅助降血糖作用及其机制研究[D];四川大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 王艳杰;实验性脾气虚证大鼠糖代谢变化的实验研究[D];辽宁中医学院;2003年
2 周亚兵;酸味中药复方对实验性2型糖尿病大鼠糖、脂肪代谢的影响[D];第二军医大学;2004年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王华;葡萄糖激酶基因与糖尿病[J];国外医学.内分泌学分册;1994年02期
2 王健军,邱长春;葡萄糖激酶基因与Ⅱ型糖尿病[J];中华医学遗传学杂志;1995年06期
3 郑宏庭,邓华聪,蹇锐,兰丽珍,方芳;葡萄糖激酶基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的构建及鉴定[J];第三军医大学学报;2004年16期
4 项坤三,吴松华,黄琪仁;中国人Ⅱ型糖尿病与葡萄糖激酶基因群体相关性的研究[J];中华内科杂志;1994年03期
5 班博!210029,王华!210029,何戎华!210029;葡萄糖激酶基因与2型糖尿病[J];临床内科杂志;1999年06期
6 马晓伟;家族性非胰岛素依赖型糖尿病葡萄糖激酶基因的分子筛选[J];中国糖尿病杂志;1995年01期
7 ;葡萄糖激酶基因治疗2型糖尿病获重大突破[J];糖尿病新世界;2009年03期
8 钱玉宁;日本非胰岛素依赖型糖尿病患者葡萄糖激酶基因单串重复DNA多态性(STRPs)[J];中华内科杂志;1994年03期
9 李小英,孙荣,郑以漫,高梅,赵列宾,宁光,许曼音,陈家伦;家族性非胰岛素依赖型糖尿病的葡萄糖激酶基因研究[J];中华内分泌代谢杂志;1997年03期
10 吴胜前;葡萄糖激酶的基因突变可能是成年型糖尿病少年发病的原因[J];生理科学进展;1992年04期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 杨香玖;李丽;;葡萄糖激酶基因微卫星多态性与2型糖尿病的关联研究[A];中华医学会第六次全国内分泌学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 记者 许琦敏;基因“修理工”安全控血糖[N];文汇报;2008年
2 本报记者 章果果;基因治疗Ⅱ型糖尿病研究获重要进展[N];金华日报;2008年
3 方明;我国治疗Ⅱ型糖尿病获重大突破[N];中国妇女报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 郑宏庭;联合表达成熟胰岛素与葡萄糖激酶的HepG2细胞构建研究[D];重庆医科大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 李秀娟;pcDNA3.1(+)/hFasL真核表达载体的构建及在甲状腺相关性眼病动物模型中的治疗应用[D];重庆医科大学;2006年
2 张雅静;宫内发育迟缓大鼠胰腺PDX-1的表达及意义[D];中国医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026