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《中国组织工程研究》 2014年35期
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乌司他丁抑制破骨细胞活化及与基质金属蛋白酶2和9的关系:预防假体骨溶解的潜在价值

茹江英  赵建宁  郭亭  俞磊  丁浩  江辉  
【摘要】:背景:推测尿胰蛋白酶抑制剂可能在假体磨屑诱发的机体炎症反应中,对局部组织在缺血缺氧、长期慢性炎症环境下起保护作用,并可抑制破骨细胞的增殖和活化。目的:探讨尿胰蛋白酶抑制剂在核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导RAW264.7细胞分化、增殖及形成成熟破骨细胞中的作用及与基质金属蛋白酶2和9的关系。方法:采用不同浓度尿胰蛋白酶抑制剂(0,500,5 000 U/mL乌司他丁)处理小鼠单核/巨噬细胞株RAW264.7后24,48,72 h。实验分为4组:空白组(RAW264.7细胞)、RANKL诱导组(0 U/mL乌司他丁)、500 U/mL乌司他丁组和5 000 U/mL乌司他丁组。结果与结论:1MTT法检测结果表明,尿胰蛋白酶抑制剂乌司他丁浓度在0-5 000 U/mL对RAW264.7细胞增殖无明显影响(P0.05)。2抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测结果表明,与RANKL诱导组相比,乌司他丁组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数量均显著减少(P0.05),呈时间剂量依赖关系。3免疫组织化学结果显示,与RANKL诱导组比较,乌司他丁组的基质金属蛋白酶9染色阳性细胞百分率均显著降低。4Western blot结果显示,单独RAW264.7细胞仅表达少量基质金属蛋白酶9,加入RANKL 48 h后基质金属蛋白酶9蛋白大量表达,5 000 U/mL乌司他丁组培养72 h后,基质金属蛋白酶9蛋白表达显著减少。5明胶酶谱分析结果显示,与RANKL诱导组比较,5 000 U/mL乌司他丁组基质金属蛋白酶9活性水平均显著降低(P0.05)。结果表明,尿胰蛋白酶抑制剂对RANKL诱导破骨细胞活化具有一定的抑制作用,且可降低基质金属蛋白酶9的表达水平及活性。

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