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《中国组织工程研究与临床康复》 2009年22期
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电脉冲诱导的肝癌细胞凋亡效应和线粒体跨膜电位变化

姜方弋  唐丽灵  刘欢  曾超  米彦  梁可道  孙才新  
【摘要】:背景:目前已有报道证实,电脉冲能诱导癌细胞发生凋亡。目的:测试在不同参数电脉冲处理下人肝癌细胞的凋亡效应以及线粒体跨膜电位变化。设计、时间及地点:对照观察实验,于2007-03/2008-03在重庆大学生物流变科学与技术教育部重点实验室、电气工程学院输配电装备及系统安全与新技术国家重点实验室完成。材料:SMMC-7721人肝癌细胞与HL-7702正常人肝细胞均购自中国典型培养物保藏中心。方法:采用场强、脉宽分别为200V/cm,1.8μs;250V/cm,1.8μs;600V/cm,120ns的电脉冲分别处理人正常肝细胞与肝癌细胞1min,用流式细胞术及DNALadder检测2种细胞的凋亡情况;用激光共聚焦显微镜对处理后的细胞线粒体跨膜电位变化进行实时观测。主要观察指标:不同参数电场下SMMC-7721细胞的凋亡率,SMMC-7721在不同参数电场下刺激10min的线粒体跨膜电位变化。结果:场强200V/cm及250V/cm,脉冲1.8μs的电场可以诱导肝癌细胞凋亡;120ns,600V/cm的电场未明显诱导癌细胞凋亡。DNALadder进一步证实了电脉冲诱导的细胞凋亡效应,但是120ns,600V/cm的电脉冲处理下的癌细胞却呈现出更多的DNA片段。对线粒体跨膜电位变化实时观测结果表明,电脉冲的处理降低了癌细胞线粒体跨膜电位,120ns,600V/cm的电场比1.8μs,200V/cm及250V/cm的电场更能有效的降低线粒体跨膜电位(67.09%,23.71%,28.44%)。结论:细胞的凋亡效应和线粒体跨膜电位的变化依赖于脉宽和场强等电场参数。窄脉冲对胞内结构的作用较宽脉冲更明显,而线粒体跨膜电位的降低并不能直接说明细胞发生了凋亡效应。

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