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《中国组织工程研究与临床康复》 2008年42期
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大鼠黏结蛋白聚糖1基因重组腺病毒载体的构建及感染效率

雷娟  伍卫  周淑娴  张玉玲  薛声能  
【摘要】:背景:重组腺病毒质粒的构建方法主要有体外连接法和同源重组法。同源重组法有操作复杂、耗时长、效率低、纯化难的缺点。体外连接法又不可避免非特异性的基因重组及基因突变。目的:应用改良体外连接法构建携带黏结蛋白聚糖1基因的重组腺病毒载体,测定其在心肌成纤维细胞中的感染效率。设计、时间及地点:单一样本实验,于2007-08/2008-02在中山大学附属第二医院林百欣实验中心完成。材料:穿梭载体pShuttle-CMV(含绿色荧光报告基因)和腺病毒骨架质粒pAdxsi购自诺赛基因组研究中心有限公司。方法:核苷酸序列鉴定pCMV-Sport6.1-Sdc1质粒;用KpnⅠ+XhoⅠ从质粒pCMV-Sport6.1-Sdc1切出黏结蛋白聚糖1基因片段,亚克隆至pShuttle-CMV中,形成重组穿梭质粒。用I-CeuI+I-SceI双酶切出重组穿梭质粒中CMV-Sdc1片段,亚克隆至腺病毒基因组质粒中,得到重组腺病毒质粒。将重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒AdCMVSdc1,转化体外培养的心肌成纤维细胞。主要观察指标:用DNA测序、酶切及聚合酶链反应法鉴定重组质粒和病毒,并测定重组腺病毒的滴度和感染效率。结果:①核苷酸序列分析表明,pCMV-Sport6.1-Sdc1质粒正确携带大鼠黏结蛋白聚糖1cDNA;黏结蛋白聚糖1基因被克隆于载体pShuttle-CMV上,以KpnⅠ+XhoⅠ双酶切可回收3kb的克隆片段和5.1kb的载体片段;重组腺病毒质粒用XhoⅠ酶切得到7个片段而空载体仅得到6个片段。②重组腺病毒质粒在293细胞中包装后产生的重组腺病毒对293细胞有致病作用;提取病毒DNA行聚合酶链反应鉴定可扩增出1.13kb的特异性片段;用病毒上清多次重复感染293细胞扩增重组腺病毒后,病毒滴度检测达2.0×1011PFU/mL。③用纯化浓缩后的重组腺病毒以感染复数为100感染心肌成纤维细胞,24h后所有细胞均表达绿色荧光。结论:成功构建了携带大鼠黏结蛋白聚糖1基因的重组腺病毒载体,经纯化浓缩后具有较高的滴度,能有效转染心肌成纤维细胞。
【作者单位】中山大学附属第二医院心血管内科;
【分类号】:R346

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【参考文献】
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1 李德;伍卫;周淑娴;;FKBP12.6重组腺病毒载体的构建及其心肌细胞感染效率测定[J];中山大学学报(医学科学版);2006年03期
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1 张桂蓉,梅同华;Cox模型分析非小细胞肺癌生物学因子及临床因素对患者预后的影响[J];中国临床康复;2004年05期
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4 马腾,刘学政,刘丽波,黄波;糖尿病视网膜病变的二级康复干预:人血管生成素1的克隆和分析[J];中国临床康复;2005年07期
5 刘翔,陈亦江,张馥敏,陈丽珍,哈团柱,高翔,李传富;VEGF_(165)和Ang-1协同改善急性心梗大鼠心功能[J];中华胸心血管外科杂志;2005年05期
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1 刘翔;心肌内注射Ad-VEGF_(165)和Ad-Ang1治疗大鼠急性心肌梗死的实验研究[D];南京医科大学;2004年
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3 郝嘉;严俊;郭红;肖颖彬;;RNA干扰技术沉默黏附斑激酶诱导心脏成纤维细胞失巢凋亡[J];中国临床康复;2006年25期
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6 ;组织工程研究中病毒表达载体的构建[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年28期
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9 张金康;孟国林;刘建;胡蕴玉;毕龙;袁志;段春光;李丹;刘民;白峰;黄鑫;禚文昆;马煜;;腺病毒介导入VEGF165和ANG-1双基因转染大鼠BMSCs及对其增殖的影响[A];第十九届中国康协肢残康复学术年会论文选集[C];2010年
10 鲁茁壮;倪芳;胡泽斌;王立生;吴祖泽;;5型腺病毒载体纤维顶球改造及对血液细胞的感染效率研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年
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1 记者 李天舒 通讯员 朱丹萍;一研究证实腺病毒载体依然是安全的[N];健康报;2011年
2 加闻;加拿大非典疫苗研究获新进展[N];医药经济报;2003年
3 王俊鸣;接种疫苗的猴子产生免疫反应[N];科技日报;2003年
4 刘霞;“猴子版本”艾滋病疫苗研制取得新进展[N];科技日报;2011年
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1 吴成君;Ad35腺病毒载体构建及病毒蛋白免疫原性研究[D];北京协和医学院;2009年
2 于彬;六邻体嵌合型重组5型腺病毒载体逃避预存免疫的研究[D];吉林大学;2012年
3 席启林;维生素D受体调控尿钙重吸收的分子机制研究[D];华中科技大学;2010年
4 徐尤年;血管生成素1腺病毒载体的构建及其对内毒素性肺损伤炎症消退的影响[D];华中科技大学;2010年
5 王蕾;DMT1腺病毒表达载体的构建和功能研究[D];青岛大学;2007年
6 边莉;HGF基因修饰的MSC生物学特性及免疫调控作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
7 王刚;腺病毒介导hIL-1Ra基因转染大鼠骨髓MSC及对其免疫调节因子表达调控的研究[D];吉林大学;2008年
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9 杨海;人抗凝血酶Ⅲ的cDNA克隆、表达、纯化及其重组蛋白对DIC大鼠模型的疗效研究[D];西北农林科技大学;2009年
10 张志珊;1-4型登革病毒外膜蛋白基因DⅢ区的表达及其在血清学诊断和免疫保护方面的应用研究[D];福建医科大学;2007年
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1 宋付凯;高表达hRAMP1基因腺病毒载体的构建及其在兔MSCs中表达的实验研究[D];遵义医学院;2010年
2 魏菁;腺病毒介导ChM-I基因抑制BMSCs体内构建的软骨血管化的实验研究[D];西北大学;2010年
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5 孙坚萍;EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒载体的构建和表达[D];青岛大学;2005年
6 倪芳;血液细胞靶向性腺病毒载体的构建及功能检测[D];安徽医科大学;2006年
7 王潇潇;呼吸道合胞病毒F蛋白编码基因重组腺病毒载体的构建及表达[D];北京生物制品研究所;2006年
8 孙业庆;携带IKK2dn基因重组腺病毒载体的构建及表达验证[D];苏州大学;2008年
9 潘廷明;转染cxcr4基因对骨髓间充质干细胞向SDF-1趋化能力的影响[D];福建医科大学;2009年
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