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《细胞与分子免疫学杂志》 2009年11期
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Sirt2基因的克隆及其在HEK293中的表达

王涛  王伟  徐清  关路媛  张斌  
【摘要】:目的:克隆大鼠Sirt2基因,构建其真核表达载体并在HEK293细胞中表达。方法:利用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增出包含Sirt2编码区的cDNA片段,产物纯化后T-A克隆连接至pMD20-T载体。以此为模板,将该基因编码区克隆入真核表达载体pcDNA3.1myc-his(-)中,转染HEK293细胞检测其表达。结果:测序证实所克隆的Sirt2编码区cDNA正确地插入pcDNA3.1myc-his(-)中,经免疫荧光检测证实其在HEK293细胞中得到表达。结论:成功克隆了大鼠Sirt2 cDNA,构建了其真核表达载体,并在HEK293细胞中得到有效表达,为进一步研究大鼠Sirt2的功能奠定了基础。

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