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《细胞与分子免疫学杂志》 2005年05期
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BirA酶基因表达载体的构建、原核表达及表达产物的活性鉴定

李青  吴雄文  熊敏  翁秀芳  卢小玲  梁智辉  龚非力  
【摘要】:目的:构建生物素-蛋白连接酶(BirA酶)基因的表达载体,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中表达具有生物学活性的BirA酶。方法:用PCR法扩增BirA酶基因。将PCR产物克隆入pGEX-4T-2中构建BirA酶-GST融合蛋白基因的重组表达载体pGEX-BirA。经测序验证后,在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达,表达产物采用谷胱苷肽-琼脂糖层析柱进行纯化。以带有生物素酶底物肽(BirAsubstratepeptide,BSP)的HLA-A2-肽复合物为底物,用ELISA和Westernblot鉴定表达产物的生物素化活性。结果:构建了pGEX-BirA原核表达质粒,并在大肠杆菌BL-21(DE3)中诱导表达Mr为61300的BirA酶-GST融合蛋白,表达产物经谷胱苷肽-琼脂糖层析柱纯化后,得到N端带有GST标签的BirA酶蛋白。ELISA和Westernblot的结果显示,表达产物能使HLA-A2-肽复合物生物素化。结论:成功地制备了具有生物学活性的Bi-rA酶,为研究蛋白质分子的相互作用提供了有效的制剂。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 李树春;斯肯达尔;杨宏军;何洪斌;王长法;杨少华;高运东;仲跻峰;;牛结核杆菌mpb-83基因的扩增和表达[J];山东农业科学;2010年06期
2 史曼;药立波;王立峰;李福洋;苏金;张健;李霞;刘新平;;人CXCR1基因Tet-on可调控载体的构建及其在NIH3T3中的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年03期
3 郑玉姝;赵朴;赵宏坤;;鸡IL-2基因的扩增、表达及生物学活性鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年05期
4 刘高勤;吴鸿雅;张光波;马泓冰;马珍妮;居颂光;张学光;;人重组IL-17/His蛋白的原核表达、纯化及其生物学活性[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年08期
5 章喜明;王燕菲;;构建pCool-GST-ICAD/CAD并在大肠杆菌中表达CAD核酸酶及活性研究[J];中国病理生理杂志;2006年08期
6 朱慧萌;谷学佳;任桂萍;孙阳;彭中宜;徐彤;李德山;;SUMO融合系统表达人白细胞介素17及其活性的研究[J];中国免疫学杂志;2010年07期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 李树春;斯肯达尔;杨宏军;何洪斌;王长法;杨少华;高运东;仲跻峰;;牛结核杆菌的mpb-83基因扩增和表达[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 郑玉姝;免疫抑制性病毒感染对SPF鸡脾细胞IFN-γ产生的影响[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 李树春;牛结核病流行病学调查和诊断[D];新疆农业大学;2010年
2 史曼;IL-8在类风湿性关节炎滑膜增生中的作用探讨[D];第四军医大学;2006年
3 刘高勤;人重组IL-17蛋白的表达及其生物学特性的初步分析[D];苏州大学;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 翁秀芳,陈浩,吴雄文,梁智辉,韩军艳,黄亚非,龚非力;可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卢小玲;吴雄文;翁秀芳;李青;梁智辉;龚非力;;生物素化的HLA-A*2402-抗原肽复合物的制备[J];免疫学杂志;2006年01期
2 卢小玲,吴雄文,翁秀芳,梁智辉,李青,龚非力;sHLA-A*2402融合蛋白的制备与特性研究[J];现代免疫学;2005年02期
3 朱丽君;梁兵;梁智辉;李佳楠;张彩娥;翁秀芳;吴雄文;;HLA-A*0206-BSP和-A*0207-BSP融合基因的构建与表达[J];现代免疫学;2007年05期
4 熊敏;杨敬宁;李青;吴雄文;;人可溶性单链β2m-HLA-A2-BSP融合蛋白表达载体的构建及其表达[J];华中科技大学学报(医学版);2006年01期
5 卢小玲;吴雄文;翁秀芳;李青;梁智辉;龚非力;;可溶性HLA-A*2402-pBRLF1复合物的体外折叠与四聚体化[J];华中科技大学学报(医学版);2006年02期
6 张彩娥;马仁福;桂艳;;单克隆抗体W6/32的制备及活性检测[J];武汉工业学院学报;2006年04期
7 李佳楠;董元火;;小鼠H-2D~b-BSP融合基因的构建与表达[J];江汉大学学报(自然科学版);2010年03期
8 费世江,吴雄文,翁秀芳,蔡蕾,梁智辉,韩军艳,龚非力;预先形成的重链二硫键有助于HLA-A2-抗原肽复合物体外折叠[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年02期
9 杨新星;郝友华;宋娜;陈玲;刘贽;杨东亮;;HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体的构建及初步检测应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年10期
10 梁智辉;卢小玲;吴雄文;翁秀芳;张彩娥;陆盛军;夏芳珍;龚非力;;人工抗原提呈细胞的制备和应用的研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2006年10期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 李青;1. 免疫磁性海藻酸钠复合微球的研制及在肿瘤早期诊断中的应用 2. BirA酶基因表达载体的构建、原核表达及表达产物的活性鉴定[D];华中科技大学;2007年
2 卢小玲;利用aAPC制备pMHC特异性T细胞及其在同种T细胞识别和抗肿瘤实验研究中的应用[D];华中科技大学;2007年
3 翁秀芳;抗原肽/HLA-A2复合物诱导和调节同种反应性T细胞的应答[D];华中科技大学;2007年
4 张彩娥;1.HLA-A2/HPV6E7四聚体的构建和应用 2.FPH致病基因定位于19p13.1-19pter[D];华中科技大学;2007年
5 钟茂华;可溶性HLA-G二聚体抑制同种T细胞应答的研究[D];华中科技大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 闫洁;HLA-A2/CD35scFv融合蛋白在昆虫杆状病毒载体系统中的表达与纯化[D];华中科技大学;2009年
2 夏芳珍;可溶性HLA-G1-肽复合物的体外折叠及其对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响[D];华中科技大学;2006年
3 李伟;不同起病年龄的初发2型糖尿病临床特点及一年随访观察[D];大连医科大学;2008年
4 朱丽君;HLA-A~*0206-BSP和-A~*0207-BSP融合基因的构建与表达[D];华中科技大学;2007年
5 闫洁;HLA-A2/CD35scFv融合蛋白在昆虫杆状病毒载体系统中的表达与纯化[D];华中科技大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨恩明;谭建明;杨顺良;;Notch信号通路与免疫系统[J];华夏医学;2006年03期
2 刘思国,王春来,张秀华,郭设平,郭洋,邵美丽;牛结核病病原生态学和流行病学研究[J];中国畜牧兽医;2005年03期
3 田志刚,孙汭;细胞因子的检测及其临床评价[J];国外医学(肿瘤学分册);1997年03期
4 杨翠富;人畜共患结核病的防制[J];贵州畜牧兽医;2005年02期
5 王振国,罗雁非,宋广文;牛源非典型分枝杆菌的分离与鉴定[J];吉林农业大学学报;1998年02期
6 韩根成,白云,王更银,姜曼,朱锡华;CD 59在sM AC诱导EL-4细胞增殖效应中的作用[J];免疫学杂志;1999年04期
7 周镜然,白云,姜曼,黎万玲;CD59融合蛋白表达载体构建及其在大肠杆菌中的表达[J];免疫学杂志;2000年02期
8 白云,朱锡华;抗CD59单克隆抗体的制备及鉴定[J];免疫学杂志;1994年04期
9 缪晓辉,马亚利,陈士葆,戚中田,潘卫,杜平;ELISA技术的某些改进[J];上海免疫学杂志;1994年04期
10 周丽蓉,罗永艾;结核病血清学诊断的新进展[J];中国实用内科杂志;2005年03期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 龚婷;杨孝朴;李银聚;张春杰;吴庭才;程相朝;;鸡IL-2全基因和去信号肽基因的原核表达[J];甘肃农业大学学报;2009年01期
2 马振乾;王金良;郭振环;于新友;何剑斌;沈志强;;检测细胞因子对监测鸡免疫抑制病的临床价值[J];中国畜牧兽医;2011年10期
3 孙阳;谷学佳;叶贤龙;徐黎明;陈睿;任桂萍;王秋颖;丁良军;李德山;;一株中和人IL-17免疫活性的单克隆抗体的制备[J];免疫学杂志;2011年07期
4 刘高勤;李龙标;吴鸿雅;马珍妮;陆培荣;张学光;;重组hIL-17B/His原核蛋白表达和生物学活性初步研究[J];苏州大学学报(医学版);2010年06期
5 范忠玲;王婷婷;马凤龙;胡敬东;;鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测[J];山东农业大学学报(自然科学版);2011年03期
6 李志红;张景强;;C6/36浓核病毒样颗粒在大肠杆菌中的表达与组装[J];三峡大学学报(自然科学版);2008年01期
7 田兆菊;郑玉姝;胡敬东;赵宏坤;;牛IL-18成熟蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其活性[J];细胞与分子免疫学杂志;2007年03期
8 刘高勤;吴鸿雅;李龙标;马珍妮;陆培荣;张学光;;重组hIL-17F原核蛋白表达和生物学活性初步研究[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年03期
9 朱慧萌;谷学佳;任桂萍;孙阳;彭中宜;徐彤;李德山;;SUMO融合系统表达人白细胞介素17及其活性的研究[J];中国免疫学杂志;2010年07期
10 孙贵才;徐轶尔;谢晶日;于雪峰;吴洪亮;凌小鹏;;四种不同处理方法体外培养大鼠滑膜细胞[J];中国组织工程研究;2012年07期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 田兆菊;牛IL-18成熟蛋白基因的表达、生物学活性测定及其单克隆抗体的制备[D];山东农业大学;2007年
2 史曼;类风湿性关节炎关节滑膜细胞基因表达谱分析[D];第四军医大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前7条
1 邱波;血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2010年
2 范忠玲;鸡白细胞介素18成熟蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及其活性检测[D];山东农业大学;2010年
3 王婷婷;O型FMDV VP1基因与山羊IL-18基因在昆虫细胞中的共表达与活性检测[D];山东农业大学;2010年
4 魏苹;新的肝细胞生长因子-HPPCn的分离纯化及其生物学活性的研究[D];合肥工业大学;2007年
5 余波;鹅白细胞介素-2成熟蛋白基因表达及其免疫佐剂效应的研究[D];四川农业大学;2008年
6 龚婷;鸡IL-2cDNA及其去信号肽cDNA的原核和酵母表达研究[D];甘肃农业大学;2008年
7 牛泽;重组鸡白细胞介素2对禽流感灭活苗的免疫增强作用[D];东北农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 吴涛,兰炯采,张泓,王从容,毛高才;ELISA法检测可溶性人类白细胞抗原-Ⅰ及广东人参考值的测定[J];第一军医大学学报;2002年10期
2 宁双飞,贾卫,张新海,杨琨,李琦,刘雪松,金伯泉;检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2003年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宋娜;郝友华;张正茂;吴珺;杨新星;丁红晖;杨东亮;;生物素化sH-2K~d-HBc复合物单体的构建及纯化[J];医学分子生物学杂志;2006年03期
2 翁秀芳,陈浩,吴雄文,梁智辉,韩军艳,黄亚非,龚非力;可溶性HLA-A2-肽复合物的体外折叠与生物素化[J];细胞与分子免疫学杂志;2004年03期
3 孙雷心;;生物技术简讯[J];生物技术通报;1993年12期
4 白丽;生物素化抗细胞因子单克隆抗体的制备[J];免疫学杂志;2001年03期
5 蔡英林;;生物素标记核酸探针研究进展[J];医学分子生物学杂志;1987年02期
6 王勤;张思仲;;生物素标记探针在人类单拷贝基因检测中的应用[J];中华医学遗传学杂志;1989年04期
7 廖翔;朱旭东;党颖;李涛;周晓巍;黄培堂;;通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年03期
8 滕文军,陈创夫,任雪艳,王远志,杨丽鹃,包彗芳,刘文进;新疆绵羊布鲁氏菌外膜蛋白OMP2b的克隆与表达[J];动物医学进展;2005年08期
9 赵晓瑜;张冬;李亚东;;蚯蚓纤溶酶7~#组分基因在甲醇酵母中的克隆与表达[J];河北大学学报(自然科学版);2005年06期
10 汪铭书;程安春;郭万柱;陈孝跃;;减蛋综合征病毒六邻体重组蛋白的表达和初步应用[J];病毒学报;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴珺;郝友华;丁红晖;龚非力;杨东亮;;可生物素化sH-2D~d-HBs复合物的构建及鉴定[A];中华医学会第十二次全国病毒性肝炎及肝病学术会议论文汇编[C];2005年
2 余子全;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌中杀线虫晶体蛋白基因cry6A的负表达调控[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
3 陈玉飞;祁克宗;彭开松;涂健;;鸡β-防御素-8 cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
4 张锦秀;晁生玉;史利军;候绍华;李刚;;猪圆环病毒Ⅱ型修饰Cap蛋白基因的原核表达及纯化[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
5 钱丽;钱关祥;;可生物素化HLA-A2-BSP融合基因的表达与纯化[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
6 廖富蘋;钟杨生;邓平建;黄自然;刘建军;房师松;赵锦;;转抗菌肽基因辣椒的表达产物的检测[A];中国蚕学会第四届青年学术研讨会会议论文集[C];2004年
7 党志胜;殷宏;罗建勋;关贵全;马米玲;刘志杰;王艳华;刘爱红;杨东英;蒋锡仕;;环形泰勒虫裂殖体表面蛋白(TaSP)基因高免疫原性区的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
8 尹继刚;张西臣;李建华;刘晓枫;李德昌;;抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40重组毒素的可溶性表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
9 骆学农;郑亚东;窦永喜;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的克隆和表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
10 黄宇烽;朱国华;陈德宇;;抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张洁;壳聚糖拓展制剂应用空间[N];中国医药报;2006年
2 王迪方文;等待突破[N];医药经济报;2007年
3 据卫生部;转基因食品卫生管理办法(节选)[N];中国乡镇企业报;2005年
4 丁壮 万遂如;我国主要猪传染病防治研究进展[N];中国畜牧报;2002年
5 记者 付文飙 董敬民;干好必干的事尽到应尽的责 [N];中国国门时报;2002年
6 本报记者延宏;从“雀巢”事件看转基因食品[N];科技日报;2003年
7 王振岭;基因治疗肾性贫血有前途[N];中国医药报;2002年
8 李斌;中科院成立“蛋白质与多肽药物实验室”[N];中国医药报;2004年
9 发布单位:中华人民共和国卫生部;转基因食品卫生管理办法[N];中国畜牧报;2004年
10 余海若;诺贝尔奖为何64次聚焦生命信使[N];大众科技报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李青;1. 免疫磁性海藻酸钠复合微球的研制及在肿瘤早期诊断中的应用 2. BirA酶基因表达载体的构建、原核表达及表达产物的活性鉴定[D];华中科技大学;2007年
2 史艳萍;生物素化普鲁兰多糖衍生物作为纳米药物载体的研究[D];中国协和医科大学;2007年
3 陈红丽;多糖修饰的PLGA纳米粒作为抗肿瘤药物载体的研究[D];中国协和医科大学;2009年
4 刘庆军;一种基于生物素与亲和素的快速筛选阳性细胞系统的构建[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年
5 于雁灵;比较蛋白质组定量分析及其在疾病研究中的应用[D];复旦大学;2004年
6 叶玲玲;基于生物素诱导表达系统的HEK293细胞多基因代谢工程改造[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
7 张艳;HBsAg真核表达载体的构建及在CHO细胞高效表达的研究[D];吉林大学;2008年
8 靳晓明;体外免疫吸附柱在放射免疫治疗中的作用[D];中南大学;2005年
9 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
10 潘弘;chTNT-3介导的主动靶向脂质体的研究[D];复旦大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄燕;刚地弓形虫SAG2基因的克隆、表达与ELISA方法的建立[D];上海交通大学;2007年
2 祁光宇;弓形虫自然弱毒株(QHO)棒状蛋白2基因片段的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2007年
3 姜晓娟;奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌凝聚因子A A区基因的克隆表达[D];内蒙古农业大学;2008年
4 付敏玲;苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究[D];天津大学;2006年
5 李涛;副溶血性弧菌多联融合鞭毛基因的表达与免疫特性研究[D];吉林大学;2007年
6 刘新建;大肠杆菌不耐热肠毒素亚单位的克隆、表达及A亚单位单克隆抗体的制备[D];扬州大学;2007年
7 郝丽;广州管圆线虫半乳凝素基因的克隆表达、蛋白纯化及免疫反应性研究[D];第一军医大学;2007年
8 徐海燕;血管性血友病分型组合实验的建立和临床应用[D];苏州大学;2007年
9 祖立闯;牛传染性鼻气管炎病毒重组gD蛋白间接ELISA的建立与应用[D];东北农业大学;2008年
10 张玲;短杆菌胆固醇氧化酶基因的表达研究[D];江南大学;2008年
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