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《微生物学通报》 2010年03期
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假单胞菌株M18 gacA基因的克隆、表达及蛋白纯化

任慧娟  许煜泉  董德贤  李荣秀  
【摘要】:GacA是GacS/A双元调控系统的一个组分,克隆假单胞菌株M18中的gacA基因。测序结果同Pseudomonas sp.PAO1比较,该基因2个碱基的改变未引起氨基酸的改变。将该基因克隆到表达质粒pET28b(+)中,将重组质粒经热激转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达产物经金属螯合层析柱纯化,蛋白纯度约为98%,质谱鉴定证明纯化的蛋白为GacA蛋白。CD谱分析GacA包含了4%α-helix,48%β-sheet和48%无规则卷曲。GacA蛋白的获得为进一步研究其晶体结构、生物学性能以及GacS/A双元调控系统奠定了基础。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 孙丕喜;郑风荣;陈皓文;;2010年中国海洋微生物学研究成就[J];广西科学院学报;2012年04期
2 郭艳荣;常晓月;崔晓君;魏勋斌;朱乃硕;;eEF1A1基因克隆、原核分泌表达及融合蛋白纯化[J];生物技术通报;2011年06期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 郭艳荣;一种光敏剂结合蛋白(PBP)的筛选,原核表达纯化及其与光敏剂的亲和功能研究[D];复旦大学;2011年
2 孔敏敏;大肠杆菌DNA复制相关蛋白PriC的初步研究[D];北京化工大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
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2 葛宜和,黄显清,王素莲,张雪红,许煜泉;假单胞菌gacA插入突变对藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸合成代谢的差异性调控[J];微生物学报;2004年06期
3 汤湘雍;严安;黄显清;张雪洪;许煜泉;;假单胞菌株M18gacA基因对BHL和HHL合成正调控及对PCA合成负调控无相关性[J];微生物学报;2006年03期
4 姜维芳;吴小刚;闫庆;张力群;;荧光假单胞杆菌2P24中gacA、dsbA和phoP/phoQ基因对小RNA因子RsmZ的转录调控[J];微生物学报;2008年12期
5 史鸣奇;李雅乾;王沂;黄娇芳;黄显清;许煜泉;;GacA对假单胞菌株M18两个phz基因簇和菌群传感的调控[J];微生物学报;2009年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 左静;廖晓兰;;应用假单胞菌防治植物真菌性病害研究进展[J];现代农业科技;2011年22期
2 ;LysR family factor PltR positively regulates Pyoluteorin production in a pathway-specific manner in Pseudomonas sp. M18[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2007年04期
3 张锋华;许煜泉;张雪洪;;农用杀菌剂吩嗪-1-羧酸的生物合成与基因调控[J];农药研究与应用;2006年05期
4 郑斐;黄显清;许煜泉;张雪洪;;假单胞菌M18调控基因ppbR的克隆及功能研究[J];微生物学通报;2008年02期
5 陆吉顺;李慷;张明月;李赛男;黄显清;许煜泉;;假单胞菌M18pqsR突变株的构建及其对藤黄绿菌素合成的调控[J];微生物学通报;2009年07期
6 王素莲,耿海峰,孙雷,张雪洪,许煜泉;假单胞菌M18rsmA~-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用[J];微生物学报;2004年02期
7 徐汪节,朱栋华,张雪洪,许煜泉;荧光假单胞菌M18的rpoS基因克隆及其功能分析[J];微生物学报;2004年03期
8 葛宜和,黄显清,王素莲,张雪红,许煜泉;假单胞菌gacA插入突变对藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸合成代谢的差异性调控[J];微生物学报;2004年06期
9 黄显清,葛宜和,张雪洪,许煜泉;假单胞菌M18株pltZ基因转录阻抑藤黄绿菌素ABC转运系统[J];微生物学报;2005年03期
10 汤湘雍;严安;黄显清;张雪洪;许煜泉;;假单胞菌株M18gacA基因对BHL和HHL合成正调控及对PCA合成负调控无相关性[J];微生物学报;2006年03期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 张杰;高效灭蝗基因工程菌的构建[D];四川大学;2004年
2 刘海明;甜椒根际合成抗生素假单胞菌遗传多样性分析及GP72菌株生防机制研究[D];上海交通大学;2007年
3 许景升;水稻白叶枯病菌Tdrxoo/GacAxoo调控系统的鉴定及其对运动性和毒性调控功能的分析[D];中国农业科学院;2007年
4 李雅乾;假单胞菌株M18吩嗪合成基因簇表达调控及其产物发酵优化研究[D];上海交通大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李莎;外生菌根真菌和荧光假单胞菌对油松生长和抗病性的影响[D];西北农林科技大学;2011年
2 魏海雷;GacS/GacA双因子调控系统和群体感应系统在生防荧光假单胞杆菌2P24中的作用[D];中国农业大学;2004年
3 孙海新;茶树根际促生细菌的研究[D];山东农业大学;2004年
4 王超;烟草根际促生细菌研究[D];山东农业大学;2005年
5 杨万风;水稻黄单胞菌gacA、ppsA和zur基因的克隆及功能分析[D];南京农业大学;2006年
6 郑斐;假单胞菌M18应答调控基因ppbR的克隆及功能研究[D];上海交通大学;2007年
7 陈韵;假单胞菌株M18中las菌群传感系统的鉴定及抗生素合成的调控研究[D];上海交通大学;2008年
8 袁理利;产PCA基因工程菌M18Q发酵条件优化[D];上海交通大学;2008年
9 张红艳;提高申嗪霉素对水稻纹枯病的防治效果的研究[D];上海交通大学;2008年
10 史鸣奇;GacA对假单胞菌株M18两个phz基因簇和菌群传感的调控作用[D];上海交通大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘涛;黄保华;石天虹;魏祥法;艾武;武彬;李桂明;曹顶国;;一株发酵床接种用枯草芽孢杆菌的分离鉴定[J];山东农业科学;2010年11期
2 王忠;邓灯;程顺峰;王仁杰;秦志华;王文琪;;鱼肠道弧菌外膜蛋白抗原性分析[J];水产科学;2010年08期
3 郭晓洁;辛宝平;马兴泰;夏云婷;陈实;杨业鹏;;克雷伯氏菌和伯克霍尔德氏菌复合菌群催化三硝基甲苯降解[J];催化学报;2009年12期
4 王斌;刘双凤;袁甜;;迟钝爱德华氏菌黏附及侵袭特性的研究[J];大连水产学院学报;2010年01期
5 杜涛;黄洋;罗杰;;酵母轮虫和以小球藻、螺旋藻强化的轮虫对3种仔鱼人工育苗效果的影响[J];大连水产学院学报;2010年02期
6 冯春明;景宏丽;李莹;李强;李华;;大泷六线鱼链球菌病的病原及其防治[J];大连海洋大学学报;2010年03期
7 景宏丽;李强;吴秋仙;李华;;黄海希瓦氏菌单抗介导间接ELISA快速检测技术的建立[J];大连海洋大学学报;2010年06期
8 沈星灿,梁宏,何锡文,王新省;圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展[J];分析化学;2004年03期
9 韩晓;崔承彬;韩小贤;李长伟;杨明;;放线菌野生株代谢功能的核糖体工程改造与新产抗肿瘤活性产物研究[J];国际药学研究杂志;2009年06期
10 郑风荣;陈皓文;;中国海洋微生物学2009年研究进展[J];广西科学院学报;2011年04期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张宏玲;万骏;严飞;张新胜;曹威;陶伟;黄来强;;Ezrin多克隆抗体制作及应用[J];生物技术通报;2013年01期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王晨红;杨光;邵宁生;;大肠杆菌中的小RNA调节子[J];医学分子生物学杂志;2006年06期
2 许扬,董碧蓉;铜绿假单胞菌生物被膜密度感应系统[J];华西医学;2005年02期
3 周洪友,魏海雷,刘西莉,王烨,张力群,唐文华;通过染色体整合抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚合成基因提高荧光假单胞菌生防能力[J];科学通报;2005年08期
4 祝新德,冯镇泰,许煜泉,张霞;荧光假单胞菌株M18防治甜瓜蔓枯病害[J];上海交通大学学报;2001年07期
5 许煜泉,唐玮宁,郑有丽,钟仲贤,徐悌惟;筛选假单胞菌株 M18 防治大棚黄瓜枯萎病害[J];上海交通大学学报;1999年02期
6 朱栋华,徐汪节,耿海峰,张雪洪,许煜泉;荧光假单胞菌M18 rpoD克隆及其对抗生素合成的影响[J];微生物学报;2003年03期
7 周玥,刘小锦,朱晨光,孙明,喻子牛;细菌中群体感应调节系统[J];微生物学报;2004年01期
8 王素莲,耿海峰,孙雷,张雪洪,许煜泉;假单胞菌M18rsmA~-突变株的构建及其对Plt和PCA合成的区别性调控作用[J];微生物学报;2004年02期
9 魏海雷,周洪友,张力群,王烨,唐文华;抗生素2,4-二乙酰基间苯三酚作为荧光假单胞菌2P24菌株生防功能因子的实证分析[J];微生物学报;2004年05期
10 葛宜和,黄显清,王素莲,张雪红,许煜泉;假单胞菌gacA插入突变对藤黄绿脓菌素和吩嗪-1-羧酸合成代谢的差异性调控[J];微生物学报;2004年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨青,胡学军,许小明,高晓蓉,安利佳,苏志国,J.C.JANSON;大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文)[J];生物化学与生物物理进展;2002年03期
2 周虎,赵惠仁,裴冬生,陆梁,胡书群;小鼠白细胞介素18在大肠杆菌中的表达、纯化及抗肿瘤作用研究[J];生物工程学报;2001年05期
3 张立新,李春海,孙丽亚;肿瘤MUC1/Y的克隆及其胞外段在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化和鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;2001年05期
4 李卓玉,郭晨云,袁静明;细胞毒素Gelonin的亚克隆、表达与纯化[J];药物生物技术;2002年04期
5 白杨,但汉雷,王继德,张兆山,S.ODENBREIT,周殿元,张亚历;幽门螺杆菌AlpA基因中四种黏附素基因保守区的克隆、表达、纯化及鉴定[J];生物化学与生物物理进展;2002年06期
6 张淑梅,李晶,王玉霞,王佳龙,赵晓宇;纳豆激酶基因的表达及纯化[J];生物技术;2003年06期
7 史宣玲,曹凤,季阳,杜勇,侯利华,王海涛;丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义[J];中国输血杂志;2001年01期
8 马静云,曹永长,毕英佐;传染性法氏囊病病毒VP5基因的克隆及表达[J];中国预防兽医学报;2002年06期
9 汪慧强;李平;翟琦巍;;一个新的人乙酰化酶MAK3的克隆、表达和纯化[J];细胞生物学杂志;2005年06期
10 钱丽,钱书兵,钱关祥;可生物素化HLA-A2-生物素化序列融合基因的构建与表达[J];上海免疫学杂志;2002年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 白晓东;刘晓晴;;一种新的来源于Thermus thermophilus HB8嗜热菌蛋白在大肠杆菌中的表达及功能分析[A];第九届全国酶学学术讨论会暨邹承鲁诞辰85周年纪念会论文摘要集[C];2008年
2 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要集[C];2007年
3 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
4 刘波;张耀洲;;家蚕死亡相关蛋白BmSCLP的表达、纯化及多克隆抗体的制备[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
5 滑世轩;岑东;吕建新;裴仁治;;NK4基因的克隆及在Raji细胞中的表达[A];第二届中国医学细胞生物学学术大会暨细胞生物学教学改革会议论文集[C];2008年
6 鲁会军;韩松;郑敏;李旭;李昌;金扩世;金宁一;;口蹄疫病毒泛亚株VP1基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会论文集[C];2008年
7 李念;胡国库;张义正;冯红;;黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)环氧化物水解酶的克隆及酶学性质分析[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
8 毕佳佳;梁卫红;;OsMPK14基因与水稻非生物胁迫应答有关[A];中国遗传学会植物遗传和基因组学专业委员会2009年学术研讨会论文摘要汇编[C];2009年
9 王云华;王睿睿;杨柳萌;李健峰;徐维明;郑永唐;;HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[A];中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会暨2006年年会论文集[C];2006年
10 武鸿;梅乐和;;嗜热脂肪芽孢杆菌脂肪酶基因的克隆、表达及特点的研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;空调竞争:莫克隆彩电[N];厂长经理日报;2001年
2 ;克隆联想PC[N];中国经营报;2002年
3 本报记者 赵伟;奇瑞:克隆年代的另类[N];中国质量报;2001年
4 鲁钟鸣;要创新不要克隆[N];新华每日电讯;2001年
5 本报记者 侯朝晖;“克隆”人体 赚![N];厂长经理日报;2001年
6 本报记者 马莹;在中国克隆国际名牌展览[N];中国贸易报;2001年
7 季英德;吕志国;纯化火车站悄悄改民营 [N];中国商报;2002年
8 经济学家温铁军○本报记者杨晓平;无法克隆的现代化[N];中华工商时报;2002年
9 本报记者 姚福泰;中国会克隆国际“6+3”的格局吗[N];中国汽车报;2002年
10 记者 姚备;复星重整克隆公司股权[N];中国证券报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈静;嗜热毛壳菌热稳定糖化酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2006年
2 郭润芳;疏绵状嗜热丝孢菌热稳定几丁质酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2005年
3 樊东;几种鳞翅目昆虫几丁质酶基因的克隆与表达研究[D];东北农业大学;2004年
4 张玉芹;亚硝胺生物降解与硝酸还原酶的纯化及其编码基因的克隆[D];山东农业大学;2006年
5 刘旭东;Bacillus sp. YX-1中温酸性α-淀粉酶的分离纯化及基因克隆和表达的研究[D];江南大学;2008年
6 封毅;兔子盲肠未培养微生物纤维素酶基因的克隆、表达及产物的酶学特性研究[D];广西大学;2007年
7 李燕红;福寿螺(Ampullaria crossean)内切-β-1,4葡聚糖酶的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
8 李迅;草菇cDNA削减文库的构建及三种多聚糖降解酶基因的克隆与表达[D];江南大学;2005年
9 邹克琴;苹果钙依赖蛋白激酶MdCPK1:分子克隆、表达、定位及被脱落酸的激活[D];中国农业大学;2005年
10 彭其胜;IL-10_(23-57)-PE40免疫毒素的制备及细胞毒活性研究[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 赵宏伟;DNase B基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[D];福建师范大学;2005年
2 俄世瑾;嗜热子囊菌光孢变种热稳定超氧化物歧化酶的纯化及基因克隆和表达[D];山东农业大学;2007年
3 徐蕾;结核分枝杆菌三种复活促进因子的原核表达和初步应用[D];重庆医科大学;2007年
4 吴庆运;蝗虫精氨酸激酶基因的克隆、表达、纯化及酶学性质研究[D];山东农业大学;2008年
5 胡晓航;银狐生长激素基因克隆与基因表达研究[D];东北林业大学;2005年
6 郭焕成;产纳豆激酶菌株的筛选及纳豆激酶酶原基因的克隆与表达研究[D];吉林大学;2005年
7 刘茜;水稻蛋白激酶的克隆及体外表达[D];河北农业大学;2005年
8 邱重晏;酸性蛋白酶基因的克隆及表达[D];江南大学;2005年
9 孙树民;旋毛虫肌幼虫p53 kDa和p45 kDa抗原基因的克隆、表达及鉴定[D];吉林大学;2006年
10 柯晓静;黑曲霉WP1植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2007年
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