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《天津医科大学学报》 2005年02期
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一种简易、廉价、高效构建重组腺病毒载体的方法

尹冰楠  李冬田  李秋香  
【摘要】:目的:建立构建重组腺病毒载体的简易、廉价、高效方法,为进一步应用含自杀基因的重组腺病毒治疗恶性肿瘤奠定基础。方法:PmeⅠ线性化腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV、切胶纯化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1按一定比例混合后,以化学转化法导入大肠杆菌BJ5183,在菌内进行同源重组,构建重组腺病毒质粒rpAdEasyGFP。以脂质体法将重组质粒转染293细胞包装重组腺病毒rAdGFP。结果:细菌内同源重组率高达80%;在293细胞中成功产生重组腺病毒。结论:对目前应用广泛的AdEasy系统进行了有效改进,在获得较高阳性重组率的同时,降低了对实验室设备的要求。

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 吕纯业;重组腺病毒介导的人内皮抑素、反义K-Ras基因联合转染治疗胰腺癌的实验研究[D];第二军医大学;2007年
2 姜友昭;PPARδ对胰岛β细胞脂代谢及胰岛素分泌的影响[D];第三军医大学;2007年
3 阴金波;BMP4与noggin在大鼠KA颞叶癫痫模型海马神经发生和癫痫形成中的作用[D];第三军医大学;2007年
4 余资江;noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究[D];第三军医大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 陈小华;人IFN-β基因复制缺陷型腺病毒载体的构建[D];郑州大学;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 杨文宇,黄宗海,汤福祥,钱勇,车小燕;“两步转化法”高效制备携带自杀基因的重组腺病毒载体[J];第一军医大学学报;2004年02期
2 胡中波,仲照东,张友山,彭程,卢运萍,邹萍;一种重组腺病毒载体产生及操作的新方法[J];华中科技大学学报(医学版);2003年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 宋长绪,蒋智勇,王贵平,高向阳,赵亚华;猪圆环病毒2型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达[J];中国预防兽医学报;2005年05期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 祝卫国;宋长绪;王贵平;杨增歧;王旭荣;黄忠;张春红;;猪Ⅱ型圆环病毒ORF1、ORF2基因串联重组腺病毒的构建[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 祝卫国;宋长绪;王贵平;杨增歧;王旭荣;黄忠;张春红;;猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF1基因重组腺病毒的构建及其表达[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
3 宋长绪;蒋智勇;王贵平;高向阳;赵亚华;;猪圆环病毒Ⅱ型GD株ORF2基因重组腺病毒的构建及其表达[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 吕纯业;重组腺病毒介导的人内皮抑素、反义K-Ras基因联合转染治疗胰腺癌的实验研究[D];第二军医大学;2007年
2 熊炬;Mda-7/IL-24基因与卵巢癌耐药细胞凋亡及耐药性的实验研究[D];四川大学;2007年
3 孙永科;表达猪瘟病毒石门株E0/E2基因重组腺病毒的构建及其免疫效果研究[D];西北农林科技大学;2007年
4 于永生;人尿激酶原突变体的构建与特性分析[D];西北农林科技大学;2005年
5 余资江;noggin基因修饰神经干细胞移植治疗衰老模型小鼠的实验研究[D];第三军医大学;2006年
6 杨帆;腺病毒转染核糖体蛋白基因RPS26对人结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤生长分化影响的实验研究[D];四川大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 林长乐;人MIP-1α重组腺病毒的构建、表达及其趋化作用的初步研究[D];暨南大学;2007年
2 于燕萍;重组腺病毒AdPEDF的构建及其真核表达的实验研究[D];天津医科大学;2007年
3 祝卫国;猪2型圆环病毒ORF1、ORF2基因的克隆表达[D];西北农林科技大学;2005年
4 王旭荣;5株PRRSV ORF3,5,6基因的变异分析及ORF3-5串联基因重组腺病毒的构建[D];西北农林科技大学;2005年
5 陈小华;人IFN-β基因复制缺陷型腺病毒载体的构建[D];郑州大学;2006年
6 贺芳;重组腺病毒HIV-1 vpr基因的构建、表达及其生物学功能的初步研究[D];暨南大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡中波,仲照东,张友山,彭程,卢运萍,邹萍;一种重组腺病毒载体产生及操作的新方法[J];华中科技大学学报(医学版);2003年04期
2 蒋奎荣,刘训良,苗毅,卢春,戴存才,徐泽宽,钱祝银;逆转录病毒载体介导反义K-ras基因治疗胰腺癌的实验研究[J];世界华人消化杂志;2004年11期
3 蔡建庭!310009杭州,钱可大!310009杭州,吕俊陞!310009杭州;反义寡脱氧核苷酸在不同作用时点对人胰腺癌细胞系Pa Tu8988s作用的影响[J];中华消化杂志;2000年06期
4 陈建发,黄宗海,黄元媛,汤福祥,杨文宇,车小燕;简化的两步法细菌内同源重组高效制备腺病毒质粒[J];肿瘤防治杂志;2003年05期
5 何庆,王保平,刘铭,苏京,王晶,陈克勤,尹潍;高浓度游离脂肪酸对胰岛细胞凋亡及相关基因表达的影响[J];天津医药;2004年05期
6 范晓棠,蔡文琴,徐海伟,杨忠,张金海;Noggin mRNA与BMP4 mRNA在不同发育年龄大鼠海马与大脑皮层的表达[J];第三军医大学学报;2003年16期
7 汪圣毅;王玉琦;符伟国;刘康达;刘弋;;人脐带动脉平滑肌细胞的培养及纯化[J];安徽医科大学学报;2007年02期
8 江千里,王健民,江汕,温丽敏,周虹;经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究[J];第一军医大学学报;2003年10期
9 张梅,何金生,朱梅,汪红俊;重组腺病毒方法的改建[J];中国公共卫生;2005年01期
10 汪圣毅,王玉琦,符伟国,刘康达,张岩,张文夺;从体外培养的外周血单个核细胞克隆人白细胞介素-10cDNA[J];中华实验外科杂志;2005年06期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 魏道严,糜军,陈诗书;细菌内同源重组法高效制备含CD、TK融合自杀基因重组体腺病毒[J];癌症;2000年05期
2 李文辉,王树蕙,张云,刘力,public.east.cn.net;用大肠杆菌同源重组获得克隆化重组腺病毒基因组[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 魏旭东;腺病毒载体及其在血液病基因治疗中的应用和研究进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2000年01期
2 杨旻,王臻,李立文;肿瘤基因治疗中腺病毒载体的转导靶向[J];中国骨肿瘤骨病;2002年04期
3 郝春秋;冯志华;聂青和;;腺病毒载体的特点及其在HCV研究中的应用[J];世界华人消化杂志;2003年06期
4 安然;;“肠状”腺病毒载体有望推进基因治疗[J];国外医学情报;2003年10期
5 鞠海兵,程在全,舒子正,胡灯明,王力,沈菲菲,杨举伦;重组人Bcl-2腺病毒载体的构建与鉴定[J];中国医师杂志;2004年07期
6 相文忠,毕志刚;腺病毒载体在皮肤科基因治疗中的应用[J];国外医学.病毒学分册;2004年03期
7 杨佳荟,沈茜;小鼠FasL全长cDNA的克隆与FasL腺病毒载体的构建[J];细胞与分子免疫学杂志;2005年01期
8 柳林,刘银萍,潘欣,孙琰,徐琪,沈炜,刘志勇;血管内皮细胞生长抑制因子VEGI_(151)重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用[J];眼科研究;2005年03期
9 肖颂华,沈庆煜,黄仕雄,杨淞然,刘中霖,王莉梅,彭英,邢诒刚,刘军;重组Persephin腺病毒对6-OHDA损伤神经干细胞的保护作用[J];中山大学学报(医学科学版);2005年03期
10 王耿,何国祥,冉擘力,张萍,景涛,陈渝;腺病毒介导gax基因转染对血管平滑肌细胞迁移的影响[J];第三军医大学学报;2005年14期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李金萍;张光谋;胡颖;柯杨;林仲翔;张志谦;;简便快速制备外分泌抗肿瘤效应因子腺病毒的新方法[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
2 王晋慧;姚明忠;顾锦法;孙兰英;郎明非;刘菁;刘新垣;;肿瘤靶向性腺病毒载体的构建[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
3 臧荣余;秦慧莲;陆浩均;张志毅;蔡树模;施达仁;卢大儒;;腺病毒介导Ela治疗人卵巢癌移植瘤的研究[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年
4 李红运;伍亚民;廖维宏;;含p75 NTR基因的腺病毒载体的构建[A];中国生理学会第21届全国代表大会暨学术会议论文摘要汇编[C];2002年
5 凌昌全;李绍祥;张晨;张亚妮;;携蜂毒素基因腺病毒载体的构建及体外抑瘤实验研究[A];第九届全国中西医结合肿瘤学术研讨会论文集[C];2002年
6 张岩;刘贤锡;胡海燕;刘师莲;刘传华;王伟;张冰;孙爱华;姜广水;;人ODC基因反义RNA腺病毒载体的构建及其体外抑瘤作用的研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
7 马立新;马琪;徐松;;新型、简捷、有效的方法构建基于腺病毒载体系统的cDNA表达文库[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
8 田长富;李殿俊;刘旭;李大林;解丽华;;hB7-1重组腺病毒感染的肿瘤细胞的生物学特性[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
9 李殿俊;曹雪涛;叶胜龙;;肿瘤生物治疗新方法的研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
10 田长富;刘旭;;癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅰ)[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王雪飞;支架+转基因可减少心脏介入术后血管再狭窄[N];健康报;2000年
2 洪奇;基因疗法改良皮肤细胞生物新材料修复骨缺损[N];中国医学论坛报;2001年
3 繁星;埃波拉病毒疫苗研究进展[N];中国医学论坛报;2001年
4 ;基因治疗冠心病的研究概况_(五)[N];中国医学论坛报;2001年
5 陈松鹤;慢性淋巴性白血病的基因治疗[N];中国医学论坛报;2001年
6 解放军三零二医院传染病研究所基因治疗研究中心 成军;肝纤维化的基因治疗研究进展[N];中国医学论坛报;2001年
7 记者赵路;科学家开辟心血管病治疗新途径[N];科学时报;2002年
8 王吉云;基因疗法可将心肌细胞转变为起搏细胞[N];中国医学论坛报;2002年
9 宁育 摘译;人组织激肽释放酶:缺血性疾病靶向治疗新突破[N];中国医学论坛报;2002年
10 孙伟平;脑梗死———基因治疗的潜在目标[N];中国医学论坛报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陶陶;重组腺病毒HIF-1α基因治疗脑缺血的实验研究[D];重庆医科大学;2005年
2 朱毅;STAT1抑制策略探讨[D];南京医科大学;2005年
3 韩久卉;腺病毒介导的外源性基因在脊髓和周围神经表达及其影响因素的实验研究[D];河北医科大学;2005年
4 刁彦鹏;腺病毒载体介导转染CD基因抑制大鼠移植静脉内膜增生及其机制的实验研究[D];中国医科大学;2005年
5 王飞;人乳头瘤病毒11型早期蛋白E7重组腺病毒载体的构建及转染树突状细胞的研究[D];南京医科大学;2005年
6 徐驯宇;转染ANG及转染VEGF基因的自体骨髓间充质干细胞移植治疗慢性缺血性心脏病的实验研究[D];第二军医大学;2005年
7 孟舒;血管生成素相关蛋白2基因促进缺血心肌血管新生的研究[D];第二军医大学;2005年
8 胡榕;核因子—κB在凝血酶诱导平滑肌细胞增殖中的作用及其反义RNA的干预研究[D];福建医科大学;2005年
9 张岩;腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA抑制前列腺癌的实验研究[D];山东大学;2005年
10 唐兵;AT2R基因在体转染对大鼠颈动脉新生内膜增生的抑制作用及其机制研究[D];第三军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 朱锋;蛋白聚糖Ⅱ重组腺病毒载体对高糖环境下大鼠肾系膜细胞细胞外基质mRNA水平的影响[D];浙江大学;2005年
2 李鹏;人外周血单核细胞来源树突状细胞成熟的影响因素[D];南京医科大学;2005年
3 郭志远;含hTRAIL及LUC基因的腺病毒双表达载体的构建[D];河北医科大学;2005年
4 孙坚萍;EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒载体的构建和表达[D];青岛大学;2005年
5 武猛;体内转染腺病毒载体Ad/CMV-hTGF-β1对兔椎间盘退变保护作用的研究[D];青岛大学;2005年
6 王伟;重组复制缺陷型腺病毒载体介导的VEGFcDNA和bFGFcDNA联合应用基因治疗缺血皮瓣的实验研究[D];安徽医科大学;2005年
7 朱自满;腺病毒介导PTEN基因对结肠癌细胞生物学行为的影响[D];第三军医大学;2005年
8 杨润琳;肝癌细胞中STAT3的功能初步研究[D];南京师范大学;2005年
9 苏秀云;应用AdEasy腺病毒载体系统构建携带人骨形成蛋白2基因的重组腺病毒[D];第一军医大学;2005年
10 寿成珉;腺病毒介导的蛋白聚糖Ⅱ基因转染对高糖环境下大鼠系膜细胞增殖,TGF-β1及细胞外基质的作用[D];浙江大学;2006年
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