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《实验动物科学》 2017年03期
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小鼠腺病毒荧光定量PCR方法的建立及初步应用

杜江涛  宋晓明  周莎桑  吕宇  萨晓婴  褚晓峰  应华忠  戴方伟  
【摘要】:目的基于TaqMan建立小鼠腺病毒(MAdV)特异的荧光定量PCR检测方法,用于调查长爪沙鼠和小鼠等实验动物中MAdV感染情况。方法从NCBI下载小鼠腺病毒(MAdV-A和MAdV-3)基因组序列,比对分析后选择保守性较好的基因设计引物和探针。筛选最佳引物对和探针,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行验证,运用所建立的方法对长爪沙鼠和野鼠的共41份样本进行检测。结果经特异性和灵敏度鉴定,在设计的3对引物探针中确定一对最佳引物探针MAD-3,可区分小鼠腺病毒与猴腺病毒、禽腺病毒和树鼩腺病毒等24种病原,MAdV质粒DNA最低检测限为4.5 copies/reaction;MAdV纯病毒液和病毒/组织模拟样本的最低检测限均为440 copies/reaction。结论建立的Taq Man荧光定量PCR检测方法特异、灵敏和稳定,可用于大鼠、小鼠、长爪沙鼠等实验动物及鼠源性生物制品MAdV的检测。
【作者单位】浙江省医学科学院实验动物中心;杭州师范大学实验动物中心;
【关键词】小鼠腺病毒 荧光定量PCR
【基金】:国家科技支撑计划项目子项目(No.2013BAK11B01-41,2015BAI09B01-02) 浙江省科技计划项目(No.2016C37106、2016F30001) 杭州市重大科技创新项目(No.20142013A62)
【分类号】:Q95-33
【正文快照】:
小鼠腺病毒(Mouse adenovirus,MAd V)属腺病毒科,哺乳动物腺病毒属,无包膜,病毒粒子直径65~80 nm,呈二十面体等轴对称,核酸型为线性双股DNA。是一种人兽共患病毒,分布十分广泛[1]。在小鼠群中多呈隐性感染,是SPF级小鼠要求检测项目之一。中国药典对鼠源性生物制品要求检测的8

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