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《实验动物科学》 2017年03期
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鸭瘟重组病毒穿梭载体的构建及分析

刘柏含  牛银杰  赵丽丽  弥春霞  陈洪岩  
【摘要】:目的本研究目的为构建重组穿梭载体,拯救带有增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)重组病毒,为重组二联苗的研制奠定基础。方法选择已经证实的US区域的US2-SORF3、US7-US8和UL区域中的UL15-UL18的非编码区作为插入位点构建穿梭载体P-US2-SORF3-EGFP,P-UL15-UL18-EGFP,P-US7-US8-EGFP。在已感染疫苗毒的鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblasts,CEFs)中转染穿梭载体,经细胞同源重组,收集细胞上清,进行噬斑筛选及纯化。结果成功构建了三个带有EGFP标签的穿梭载体,p Blusecript II SK构建的穿梭载体未成功筛选到重组噬斑而用p UC18构建的穿梭载体成功筛选到重组噬斑。结论拯救鸭瘟重组毒的研究中,p Blusecript II SK载体可能不是最佳的适用载体,也可能是插入位点为病毒复制的必须区。
【作者单位】牡丹江师范学院生命科学与技术学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室;
【基金】:黑龙江省地方科技攻关计划课题(No.2014QA3BN002) 黑龙江省自然科学基金重点项目(No.ZD2016006)
【分类号】:S852.65
【正文快照】:
鸭瘟(Duck Plague,DP)是鸭肠炎病毒(DuckEnteritis Virus,DEV)引起的鸭、鹅雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病,主要引起4周龄以上的成年鸭发病、死亡。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,病毒粒子呈球形,基因组为双链DNA,大小约为150kb,含有大量的复制非必须区[1]。国内外对疱疹

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