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《现代肿瘤医学》 2017年16期
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重组溶瘤腺病毒rAd-CMV-E1A的构建及其对人鼻咽癌细胞放射增敏的研究

汪茜  朱苹  吴丽芳  陈建武  洪金省  应学明  赵建华  
【摘要】:目的:构建腺病毒r Ad-CMV-E1A,将其作用于人鼻咽癌CNE-1细胞,验证目的基因E1A是否具有放射增敏作用及其作用机制。方法:使用"两步转化法",完成质粒p Ad-p Shuttle-CMV-E1A的构建,将其包装成腺病毒r Ad-CMV-E1A;以相同的方法构建腺病毒r Ad-CMV。使用噬菌斑法测定滴度。将病毒作用于CNE-1细胞,使用RT-PCR、实时荧光定量PCR检测E1A、p53、p21基因表达情况;联合X射线照射细胞,采用MTT比色法、细胞克隆形成实验、Annexin V-FITC/PI双染检测目的基因功能。结果:成功构建腺病毒r Ad-CMV-E1A及腺病毒r Ad-CMV,测得病毒滴度分别为1×1010pfu/ml。被转染目的基因E1A的CNE-1细胞能稳定转录E1A基因,会使p53基因转录增加,抑制p21基因转录。在2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy剂量下细胞生长抑制率r Ad-CMV-E1A组高于r Ad-CMV组(P0.05);0 Gy下r Ad-CMV-E1A组高于r Ad-CMV组(P0.05)。射线+r Ad-CMV-E1A组凋亡率最高(P0.05)。相同放射剂量下r Ad-CMVE1A组细胞存活分数低于r Ad-CMV组、PBS组(P0.05);放射增敏比:r Ad-CMV-E1A组高于r Ad-CMV组。结论:成功构建腺病毒r Ad-CMV-E1A及腺病毒r Ad-CMV,目的基因E1A在CNE-1细胞中能稳定转录,并增加靶细胞对X射线的敏感性,其机制可能是通过诱导下游p53基因高转录、抑制p21基因转录。

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