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《中国生物制品学杂志》 2009年02期
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旋毛虫Serpin基因的体外表达及其特性鉴定

吴秀萍  于申业  刘相叶  王学林  杨勇  王子见  夏慧卿  邓洪宽  Boireau P  刘明远  
【摘要】:目的体外表达旋毛虫丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)基因,并检测其在旋毛虫不同发育时期mRNA转录、蛋白表达与分子定位及反应原性情况,为以其作为候选诊断抗原基因提供实验依据。方法根据旋毛虫Serpin基因序列,以重组质粒pBlue-script-WM5为模板,利用PCR技术去除其全长cDNA的信号肽序列,采用原核表达载体pET-28a构建不含该基因信号肽的、融合蛋白不含组氨酸标签的重组表达质粒pET-28a-WM5,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,采用Westernblot法检测反应原性。免疫组织化学技术检测Serpin蛋白在旋毛虫不同发育时期的表达及定位情况。采用RT-PCR和实时定量RT-PCR技术检测Serpin基因在旋毛虫不同发育时期的转录水平。结果重组质粒pET-28a-WM5经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确,Serpin基因能够在大肠杆菌中高效表达。重组蛋白主要以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的51.1%。纯化后的重组蛋白纯度可达98%,与猪抗旋毛虫60d抗血清有较好的反应原性,与26d猪抗血清无明显反应信号;RT-PCR与实时定量RT-PCR结果显示,该基因在旋毛虫不同发育时期均有转录,但转录水平有明显差异,有2个转录高峰期(Ad2/Ad3和ML)以及1个转录水平明显下降期(Ad5);免疫组化鉴定表明,Serpin天然抗原在旋毛虫肌幼虫时期18d开始表达,且在感染35d后大量表达和分泌。结论已获得较高纯度的旋毛虫Serpin体外表达融合蛋白,其具有较好的反应原性。旋毛虫Serpin基因具有期特异性表达的特点,且在肌幼虫期具有高转录与高表达水平,可作为捕获旋毛虫肌幼虫期循环抗体的候选诊断抗原基因。

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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘明远,付宝权,吴秀萍,卢强,任瑞文,姚春雨,牛廷献,张西臣,黎诚耀,P.Boireau;旋毛虫新生幼虫期特异性T668全长cDNA的克隆及序列分析[J];中国兽医学报;2002年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
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中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 任瑞文;旋毛虫新生幼虫期特异性基因的筛选与表达[D];中国人民解放军军需大学;2001年
2 夏慧卿;旋毛虫肌幼虫WM5抗原基因的克隆、表达及鉴定[D];吉林大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁慧君,闫玉河;旋毛虫病检测技术及ES抗原的研究进展[J];河南职技师院学报;1999年02期
2 付宝权,原丽红,张亚兰,吴秀萍,李莲瑞,卢强,刘明远,陈启军,P.Boireau;旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析[J];吉林农业大学学报;2004年03期
3 丁利,诸欣平,杨静,王少华,周蕾;旋毛虫Ts87重组蛋白诱发小鼠保护性免疫的研究[J];寄生虫与医学昆虫学报;2003年04期
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
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7 牛廷献,刘明远,卢强,付宝权,吴秀萍,郑明光,Pascal Boireau;旋毛虫G10-7基因在大肠杆菌中的高效表达[J];中国兽医学报;2002年05期
8 张亚兰,付宝权,刘明远,原丽红,吴秀萍,李莲瑞,卢强,陈启军,P.Boireau;旋毛虫3日龄成虫cDNA文库的免疫筛选[J];中国兽医学报;2004年04期
9 原丽红;付宝权;刘明远;林本夫;张亚兰;吴秀萍;卢强;陈启军;P.Boireau;;旋毛虫感染小鼠对p46000重组抗原的抗体应答[J];中国兽医学报;2006年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 白丽娜;旋毛虫种株基因组DNA多态性研究[D];中国医科大学;2003年
2 吴涛;旋毛虫抗BalB/C小鼠体内Sp2/0肿瘤效应的研究[D];吉林大学;2005年
【相似文献】
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 袁慧君;闫玉河;张改平;李健强;;旋毛虫肌幼虫ES抗原的结构基因TSPGⅡ在cos7细胞中的表达[A];中国动物科学研究——中国动物学会第十四届会员代表大会及中国动物学会65周年年会论文集[C];1999年
2 杨静;诸欣平;张新梅;高欣;杨雅平;刘明远;P.Boireau;;旋毛虫成虫期特异性新基因的筛选与序列分析[A];中国动物学会第六届全国青年寄生虫学工作者学术讨论会论文摘要集[C];2000年
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