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《生物技术通讯》 1998年04期
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抗人血管内皮生长因子单链抗体基因的构建、表达及活性鉴定

杨西川  王大章  郑光勇  袁清安  俞炜源  
【摘要】:鼠单克隆抗体E11能与人血管内皮生长因子(VEGF)特异结合,已用于临床检测恶性肿瘤细胞VEGF的表达,并初步证明其体内抑瘤活性。为便于大规模生产,特进行基因工程改造,构建小分子的单链抗体(scFv)。首先通过逆转录及多聚酶链式反应(PCR),分离并克隆E11的可变区基因。经测序表明,E11轻链可变区(VL)基因全长333bp,编码111个氨基酸,归属小鼠轻链可变区基因第Ⅲ亚组。重链可变区VH基因全长369bp,编码123个氨基酸,归属小鼠重链可变区基因Ⅱ(A)亚组。然后用一编码亲水性多肽接头的DNA片断将E11单抗轻、重链可变区基因连接,构建表达质粒pET-15YV,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。表达产物(包含体)经变性及复性后,用免疫组化法检测该单链抗体结合抗原(颊癌)能力。对颊癌组织检测的结果表明,基因工程抗体scFv与亲代抗体一样,具有较高的组织特异性。本研究获得的抗人VEGF单链抗体具有潜在的临床价值,为肿瘤放射免疫显像及以血管为靶标的抗血管生成治疗奠定了基础。

【引证文献】
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1 韩进,夏成青,高居忠,邢长虹,杨新庆,唐小奈,邱繁荣,杜燕夫;血管内皮细胞生长因子在结直肠组织中的表达及其意义[J];中华医学杂志;2002年07期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 涂友明,邓小斌,沈世强,王汉林;VEGF和E-cadherin在结直肠癌中的表达及其意义[J];腹部外科;2004年04期
2 程琪辉,孙淑华,麦羡霞,李新爱;恶性肿瘤患者血清VEGF的检测及临床意义[J];肿瘤研究与临床;2005年03期
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1 杜俊瑶;Apigenin对人卵巢癌细胞系CAOV3的抑制作用及相关机制研究[D];中国医科大学;2007年
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2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
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1 林志伟;汪世华;王宗华;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇单链抗体(DON-ScFv)在枯草芽孢杆菌中高效表达与分泌[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
2 杨燕凌;;酶(蛋白)融合技术研究[A];华东地区农学会学术年会暨福建省科协第七届学术年会农业分会场论文集[C];2007年
3 汤永民;宁铂涛;曹江;沈红强;钱柏芹;张海忠;张怡;郭莉;;抗人CD14新克隆ZCH-7-2F9单链抗体真核表达载体的构建、表达及鉴定[A];2005年华东六省一市血液病学学术会议暨浙江省血液病学学术年会论文汇编[C];2005年
4 王楠;牟颖;孙晔;吕绍武;闫岗林;罗贵民;;含硒单链抗体酶的制备及其抗氧化作用[A];第七届全国酶学学术讨论会论文摘要集[C];2004年
5 汪世华;胡开辉;王宗华;;单链抗体的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
6 郭崇志;王玉霞;孙曼霁;;抗电鳐乙酰胆碱酯酶单克隆抗体3F3的单链抗体高级结构的计算机模拟及其抑制酶活性机理探讨[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年
7 汪世华;;运用噬菌体展示技术淘选基因工程单链抗体的研究[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
8 祝怀平;王迎春;季顺东;江淼;白霞;阮长耿;;抗vWF与GPIb-IX结合部位的单链抗体制备及功能研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
9 杨涛;解军;张悦红;吴博威;牛勃;;利用噬菌体表面展示技术制备TNF-α单链抗体的研究[A];中国生物工程学会第四次会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2005年
10 高士争;张曦;段刚;;抗脂肪细胞特异膜蛋白scFv与人IgG1 Fc片段在毕赤酵母中的融合表达[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
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1 记者 李玉成;志在与世界比肩[N];科技日报;2001年
2 孙国瑞;杰南技术公司的专利分布[N];中国知识产权报;2005年
3 蔡忠仁;我国海洋生物毒素检测技术获突破[N];中国海洋报;2010年
4 记者 李天舒;抗狂犬病毒人源抗体制备成功[N];健康报;2011年
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1 胡学军;抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)单链抗体基因克隆及其在大肠杆菌和烟草中的表达[D];大连理工大学;2002年
2 崔福爱;BMP-6和VEGF表达载体的构建及其促进成骨作用的实验研究[D];山东大学;2010年
3 陈德宇;前列腺素D合成酶在男性生殖中的基础及应用研究[D];南京师范大学;2005年
4 王艳梅;人VEGF_(165)转基因组织工程软骨的实验研究[D];中国协和医科大学;2009年
5 邱梅红;VEGF的神经保护机制之一——诱导Kv1.2钾通道蛋白的磷酸化[D];复旦大学;2003年
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10 王宏伟;抗HIV-1单链抗体、重组毒素的制备与功能测定[D];中国人民解放军军需大学;2001年
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1 于颖;PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达与鉴定[D];山东农业大学;2011年
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