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《生物技术》 2017年05期
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人MTERF2基因特异性shRNA载体的构建与干扰效果评价

孙美涛  梅雯  王唯斯  自加吉  张晓娟  余敏  熊伟  
【摘要】:[目的]构建针对人线粒体转录终止因子2(mitochondrial transcription termination factor 2,MTERF2)的shRNA干扰表达载体,检测其对人宫颈癌HeLa细胞MTERF2基因表达的干扰效率。[方法]以人MTERF2基因为靶向,设计并合成的2条互补寡核苷酸链克隆至pSilencer~(TM)4.1-CMV neo真核表达载体中得到重组干扰质粒。对重组质粒进行PCR和DNA测序鉴定;运用脂质体介导瞬时转染HeLa细胞;采用半定量RT-PCR检测2个干扰质粒对人MTERF2基因mRNA表达的干扰效果,并筛选最有效的shRNA干扰序列;采用Western Blot技术检测2个干扰质粒转染HeLa细胞后MTERF2蛋白的表达情况。[结果]经PCR鉴定和DNA测序鉴定证实,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2重组shRNA干扰表达质粒中已插入目的 DNA片断。瞬时转染MTERF2-shRNA的HeLa细胞48 h后,pSi-MTERF2-1和pSi-MTERF2-2干扰表达质粒均可以显著地降低人MTERF2基因mRNA和蛋白质的表达(P0.01),而且pSiMTERF2-2干扰效果优于pSi-MTERF2-1。pSi-MTERF2-2对MTERF2基因mRNA和蛋白质表达的抑制率分别为74.0%、78.2%。[结论]成功构建针对人MTERF2基因的shRNA真核表达载体有效抑制目的基因的表达,为进一步应用于宫颈癌的基因治疗研究奠定了基础。
【作者单位】大理大学基础医学院;大理市第一人民医院呼吸内科;云南大学生命科学学院;
【基金】:国家自然科学基金项目(“人线粒体转录终止因子2调控氧化磷酸化对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及机制研究”,No.31601155;“hMTERF3经线粒体途径对肿瘤细胞增殖、凋亡及放化疗敏感性影响的机制研究”,No.81560458) 云南省中青年学术与技术带头人后备人才项目(第十九批) 云南省大学生创新创业计划项目(CXCY-S-2017)
【分类号】:Q78;R737.33
【正文快照】:
人线粒体转录终止因子2(mitochondrial tran-scription termination factor 2,MTERF2),又称线粒体转录终止因子样蛋白(mitochondrial transcription ter-mination factor-like protein,MTERFL)或线粒体转录终止因子结构域3(mitochondrial transcription termi-nation factor d

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