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甾短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中的表达

张玲  霍惠芝  沈微  杨海麟  邬敏辰  王武  
【摘要】:为了实现胆固醇氧化酶在大肠杆菌中的表达,将甾短杆菌Brevibacteriumsp.DGCDC-82胆固醇氧化酶基因用PCR的方法去掉信号肽序列,连接到质粒pTrc99a,通过筛选得到了表达胆固醇氧化酶的重组菌JM109/pTrc99a-COD。经IPTG诱导后表达出相对分子质量约为5.5×104的蛋白质。分别考察了诱导温度、时间、IPTG浓度等因素对重组菌表达的胆固醇氧化酶的影响。在优化条件下,该胆固醇氧化酶的酶活可以达到700 U/L。酶学特性分析表明其反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。

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