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《中国生物工程杂志》 2017年06期
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Cry3a杀虫蛋白基因的合成优化及在JK-SH007中高效表达

李阳  吴酬飞  吴小芹  叶建仁  张立钦  
【摘要】:人工合成优化Cry3a杀虫蛋白基因,并从大肠杆菌BL21(DE3)中克隆T7表达系统,通过同源重组克隆进PHKT2表达载体,将此表达载体导入吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007,通过诱导表达,成功指导合成T7 RNA聚合酶且高效表达分子量为70k Da的Cry3a蛋白。通过粗提液对二龄榆蓝叶甲进行生物毒杀试验,结果表明粗提液具有高毒性,致死中浓度(LC_(50)=0.63(0.48-0.82)g/L)。成功构建的T7表达系统,可高效表达毒性的Cry3Aa蛋白,为进一步开发杀虫生防菌剂,建立外源基因表达技术平台奠定了基础。
【作者单位】南京林业大学林学院;湖州师范学院;
【关键词】苏云金芽孢杆菌 Crya基因 吡咯伯克霍尔德氏菌 杀虫活性 表达
【基金】:国家社科基金(16@ZH005) 国家自然科学基金(31550004)资助项目
【分类号】:Q78;S476
【正文快照】:
苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(BT)分泌的杀虫晶体蛋白(ICPS)因其对害虫具有高度专一毒杀作用,且对环境和人畜安全,成为世界上应用最广泛的一类微生物杀虫剂[1].根据杀虫晶体蛋白氨基酸序列的同源性,可将他们划分为17群94亚类[2],目前已报道的编码Cry蛋白的基因达300

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