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《中国生物工程杂志》 2011年04期
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尿酸氧化酶在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

朱蕾  王庆民  武国栋  薛彤彤  孙丽霞  王晶翼  
【摘要】:尿酸氧化酶(urate oxidase,Uricase,EC.1.7.3.3)是一种能将尿酸氧化为尿囊素的蛋白酶。合成黄曲霉(Aspergillus flavus)尿酸氧化酶基因,构建表达载体pET43.1a/uox,重组质粒经双酶切鉴定和序列分析,证明插入序列正确,转化到大肠杆菌(Escherichia coli)JM109,菌株经诱导表达尿酸氧化酶蛋白,目的蛋白经过超声破碎,经检测以可溶性蛋白为主;菌体经超声破碎后,上清经过阴离子柱和阳离子柱两步纯化,得到尿酸氧化酶纯品,纯品以分光光度法进行体外酶活性测定。结果显示:尿酸氧化酶在大肠杆菌中获得高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白的50%;表达产物经过两步层析柱纯化,获得电泳扫描纯度为95%的纯品;在体外活性测定中具有分解尿酸的能力,在临床检测和治疗中有重要意义。
【作者单位】齐鲁制药有限公司药物研究院;
【分类号】:Q789

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 曾雨雷;杨波;刘志刚;邓贝;成细瑶;徐雪荣;杨康;胡征;;黄曲霉尿酸氧化酶在毕赤酵母中的分泌表达及纯化[J];食品与发酵科技;2012年04期
2 王友同;吴文俊;李谦;高美风;;近年来我国生物技术药物研究进展和趋势[J];药物生物技术;2013年01期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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2 开雷;岳珂;马晓航;;尿酸氧化酶的研究及其应用[J];科技通报;2008年02期
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4 陈志禹;何秀萍;张博润;;微生物来源的尿酸氧化酶的研究进展及应用前景[J];微生物学通报;2007年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈玮;陈建华;;牛尿酸氧化酶基因的原核表达载体构建与表达研究[J];安徽农业大学学报;2010年03期
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3 刘劲;赵敏;程廷才;朱勇;鲁成;;家蚕尿酸氧化酶基因BmUo的克隆及其序列分析与原核表达[J];蚕业科学;2008年02期
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8 邓永康;吴民泸;刘盛邦;杜林方;伍黎黎;李曼;孟延发;;乳糖诱导重组尿酸酶基因在大肠杆菌中的表达[J];中国生物工程杂志;2009年07期
9 杨秀旭;刘树玲;任军;于长明;李建民;陈薇;;重组尿酸氧化酶发酵工艺优化[J];生物技术通讯;2012年02期
10 罗侃,崔有宏,郑强,支东学,王绪明;临床生化检验工具酶的基因克隆[J];现代检验医学杂志;2003年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 王小华;一维氧化锌纳米材料传感性能研究[D];华东师范大学;2006年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李强;尿酸酶菌种筛选、提取、发酵优化、分离纯化及性质研究[D];四川大学;2005年
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4 董静;B族维生素在小鼠高尿酸血症中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
5 谭琳;基于离子液体制备纳米材料及其在电化学和生物传感器中的应用[D];云南师范大学;2009年
6 卢旭晓;纳米电极集合的制备及其在电化学、生物传感器中的应用[D];云南师范大学;2008年
7 白慧萍;纳米材料在新型酶传感器中的应用研究[D];云南师范大学;2008年
8 张金龙;半胱氨酸残基对黄曲霉尿酸氧化酶功能的意义[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
9 王钦;光致电化学过氧化氢敏感界面的构建及应用的研究[D];青岛科技大学;2010年
10 田文静;溶栓药物瑞替普酶(rPA)的大肠杆菌表达研究[D];天津科技大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 聂志林;梁培禾;霍文谦;张克勤;靳风烁;;CpG-ODN加强树突状细胞疫苗治疗小鼠膀胱肿瘤的实验研究[J];重庆医学;2010年06期
2 陈宏颉;曹磊;王守森;郑兆聪;;Livin siRNA重组腺病毒对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响[J];第二军医大学学报;2011年06期
3 高国华;李娟;谢红伟;吕卓;;重组抗肿瘤坏死因子-α人鼠嵌合单克隆抗体治疗中重度活动性类风湿关节炎的临床评价[J];南方医科大学学报;2010年04期
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6 郑秋红;谢云青;刘健;应敏刚;;乳腺癌干细胞样细胞mRNA致敏的树突状细胞疫苗免疫治疗研究[J];福建医科大学学报;2012年03期
7 金璐;赵玉伟;李知勉;赵成建;王晓飞;张凌;杨寒朔;;真核表达人和鼠可溶性VEGFR2的双基因疫苗的构建及抗肿瘤实验研究[J];四川大学学报(医学版);2010年04期
8 张书军;焦炳华;;世界海洋药物现状与发展趋势[J];中国海洋药物;2012年02期
9 解庭波;;大肠杆菌表达系统的研究进展[J];长江大学学报(自科版)医学卷;2008年03期
10 和祯泉;刘天健;吕英军;鲍恩东;;抗菌肽Folicidin-3在大肠杆菌中融合表达及抑菌活性[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2011年04期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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【相似文献】
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1 白剑宇;周晨妍;王瑾;邬敏辰;;宇佐美曲霉木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达与优化[J];食品工业科技;2007年06期
2 殷尔康;;木聚糖酶基因xynA在大肠杆菌中的高效表达[J];现代农业科技;2011年12期
3 丁玲;孟小林;徐进平;王健;鲁伟;;hrpZ基因在大肠杆菌中的高效表达与活性检测[J];西北植物学报;2005年12期
4 付加雷;宋长征;张更林;;重组干扰素-tau在大肠杆菌中的高效表达[J];食品与药品;2006年11期
5 苏国富;李丰生;黄培堂;芮贤良;黄翠芬;;痢疾志贺氏毒素B亚单位在大肠杆菌中的高效表达[J];生物工程学报;1993年01期
6 蔡月琴;马益萍;申会刚;郭军庆;周继勇;;狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达[J];中国兽医科学;2007年02期
7 李春丽,阮晖,陈正华,陈其新,何国庆;重组人β防御素3在大肠杆菌中的表达和活性分析[J];中国生物化学与分子生物学报;2005年05期
8 ;《生物工程学报》2005年第21卷总目次[J];生物工程学报;2005年06期
9 陈凡;周菁;章晓联;谭光宏;林映莹;;HIV-1 Tat基因在pEGx-KG中的融合构建及原核表达[J];海南医学院学报;2008年02期
10 杨梦华,李颖,关国华,江正强;极端耐热木聚糖酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的高效表达[J];微生物学报;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 刘婷;焦新安;潘志明;张晓明;黄金林;;破伤风毒素C片段基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
4 余兴龙;涂长春;徐兴然;张茂林;陈义祥;刘伯华;;猪瘟病毒E2基因的定点突变、在大肠杆菌中的高效表达及表达产物的免疫原性[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
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6 刘胜浩;林学政;刘晨临;黄晓航;;南极细菌低温脂肪酶在大肠杆菌中的高效表达[A];中国海洋学会海洋生物工程专业委员会2005年学术年会论文集[C];2005年
7 徐亚男;赵庆顺;徐永华;;转化生长因子α-绿脓杆菌外毒素融合蛋白的基因克隆、表达和活性研究 Ⅱ.TGF α-PE40高效表达重组质粒[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 张向颖;刘芳;谢立;修冰水;张贺秋;;肝癌诊断标志物高尔基体蛋白73基因在大肠杆菌中的表达[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
9 孙建义;付石军;钱利纯;;中性植酸酶产生菌筛选及高效表达基因工程菌构建[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
10 张瑞军;田志刚;魏海明;孙汭;刘金生;王郡甫;王增鑫;张捷;;重组人白细胞介素18的高效表达、初步纯化及其生物学活性研究[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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2 裴那;Oxoid公司推出快速确认食品中大肠杆菌的方法[N];中国医药报;2009年
3 沧州河间市畜牧水产局 程红利;一例肉鸡类巴氏杆菌和大肠杆菌混感的诊治[N];河北农民报;2011年
4 ;杆菌速灭[N];中国畜牧水产报;2001年
5 陈勇;菠菜生菜相继被“毒”,灌溉水是“凶嫌”[N];新华每日电讯;2006年
6 编译 王金元;新型相机用大肠杆菌做底片[N];北京科技报;2005年
7 记者 冯卫东;除菌香皂其实并不除菌[N];科技日报;2007年
8 冯立中;致泻大肠杆菌是腹泻病祸首[N];健康报;2006年
9 宁夏隆德县畜牧兽医站 罗志轶;中西医治疗獭兔球虫和大肠杆菌混合感染[N];江苏农业科技报;2007年
10 赵承渊 北京大学第一医院;“怪病”频出:医学昌明的代价?[N];大众科技报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 吴铭;重组人胶原蛋白肽在大肠杆菌中的高效表达及其生物活性研究[D];吉林农业大学;2011年
2 马毅;多个药物靶标蛋白在大肠杆菌无细胞系统高效表达及功能表征[D];华南理工大学;2012年
3 熊润松;狒狒尿酸氧化酶基因克隆及分子改造研究[D];北京化工大学;2012年
4 姜中其;仔猪断奶腹泻性大肠杆菌的多重耐药性、毒力因子分布及特异性蛋黄抗体药效的研究[D];浙江大学;2009年
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6 郑宗宝;一体化生物加工过程进行大肠杆菌的半纤维素琥珀酸生产[D];天津大学;2012年
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8 张彦新;高表达尿毒素分解酶基因工程菌的构建及酶活性测定[D];中南大学;2010年
9 冉宇靓;抗人VEGF165人/鼠嵌合抗体的构建及其真核高效表达[D];中国协和医科大学;1999年
10 孙凤军;大肠杆菌生物膜的形成及其耐药质粒传递和调控的研究[D];第三军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 殷尔康;疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶A在大肠杆菌中的高效表达[D];南京师范大学;2007年
2 张付凯;抗对硫磷基因工程四价抗体在大肠杆菌中的高效表达[D];中国农业科学院;2011年
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5 罗臻;在重组大肠杆菌和盘基网柄菌中高效表达可溶性人类Fas配体[D];厦门大学;2009年
6 李俊玲;融合蛋白rPEA(Ⅰa+Ⅱ)-HphA的高效表达、纯化及活性研究[D];吉林大学;2008年
7 郁建锋;重组人FL在大肠杆菌中的高效表达和生物学活性的鉴定[D];苏州大学;2004年
8 徐珍珍;人胶原蛋白原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达[D];吉林农业大学;2011年
9 王参军;5'端突变人干扰素-α2b基因在大肠杆菌BL21中的高效表达[D];安徽医科大学;2010年
10 张金龙;半胱氨酸残基对黄曲霉尿酸氧化酶功能的意义[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
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