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《中国生物工程杂志》 2008年09期
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GnRH-PEⅡ-luffinS重组嵌合毒素的制备与细胞毒性检测

刘艳华  高姗  康琳  王俊红  赵金银  高艳丽  胡瑞  王景林  
【摘要】:目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa,A549,HepG-2,SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa,A549,HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml,13.74μg/ml,16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 夏海华;于冲;曲晓军;孙建华;王金英;;绿脓杆菌外毒素A的最新研究进展[J];生物技术;2012年02期
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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10 张鸿;邓欣;张国利;;LHRH-PE40对非小细胞肺癌细胞A549的作用[J];解剖科学进展;2010年03期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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8 朱融融;汪世龙;陈小平;孙晓宇;;纳米TiO2的细胞毒性和肿瘤抑制性研究[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
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10 邱想英;;医院化疗垃圾的危害及处理对策的思考[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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3 ;JN-2518寻求合作[N];医药经济报;2004年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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3 代智;顺铂细胞毒性及大黄素预防作用分子机制[D];大连医科大学;2003年
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