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《食品科学》 2011年11期
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脂肪酶基因克隆、序列分析、表达及其催化特性

张卫国  王小宁  林影  
【摘要】:分别以R.miehei 3.4960基因组和总RNA为模板,通过PCR和RT-PCR扩增得到脂肪酶全长基因和脂肪酶cDNA碱基序列,两碱基序列测序结果比对表明:脂肪酶DNA碱基序列由5个内含子和6个外显子组成,5个内含子大小分别为75、58、64、73、59bp,位于DNA序列(以起始密码子ATG的碱基A为1)的600~674位、929~986位、1076~1139位、1227~1299位、1382~1440位碱基处。脂肪酶RML mRNA碱基序列与已公布的R.miehei脂肪酶基因mRNA(EMBL Nucleotide Sequence Database Accession No.A02536)碱基序列有5个碱基的差异,其编码的氨基酸序列有1个发生了改变。利用酿酒酵母表达质粒pICAS1,实现了脂肪酶RML基因在酿酒酵母中的高效分泌表达,并对重组脂肪酶RML进行了相关酶学性质分析。酶学性质研究表明:重组酶的最适反应温度为45℃,最适pH值为8.6;该酶偏爱中链长的酯(C8~C12),对12个碳的酯具有最佳活性,对C16长链酯也有较高的活性,对短链酯的活性较弱;金属离子Cu2+、Fe2+对酶活性有显著抑制作用,Ca2+和Mg2+对酶活有部激活作用。

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