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《食品安全质量检测学报》 2015年06期
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靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌

刘忠梅  曾繁华  罗佳  徐义刚  曲敏  莫春生  刘新亮  李苏龙  
【摘要】:目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构成复合引物。经过反应条件的优化,建立了5种致病菌的靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)扩增方法,扩增产物采用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术进行检测。结果采用Tem-PCR-DHPLC方法,检测48株试验菌株,未发现非特异性结果。对5种致病菌检测灵敏度,除金黄色葡萄球菌为620 cfu/mL外,其余都小于100 cfu/mL。对4种样品的检测结果与国家标准方法相符合。结论 Tem-PCR-DHPLC检测方法,相比传统多重PCR方法,能有效地解决引物扩增效率不均衡的问题,不需优化引物浓度,方法特异性强,灵敏度高,具有较好的实用性。

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王洁;李利平;王卫萍;李晓军;;4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法的建立[J];东南国防医药;2013年06期
2 李苏龙;张辛博;徐义刚;郑秋月;徐君怡;曹际娟;;变性高效液相色谱法高通量检测肉制品中常见致病菌[J];黑龙江畜牧兽医;2010年09期
3 金建潮;袁丹茅;何云;曹春远;;速冻面米食品中微生物污染状况分析[J];河南预防医学杂志;2007年04期
4 张晓焱;王梅;周映霞;;多重PCR技术检测肉品中致病菌的应用研究[J];肉类研究;2009年07期
5 李艳霞;吴松浩;;食品微生物检测技术的研究进展[J];食品工业科技;2008年07期
6 巢强国;杨学明;葛宇;熊薇;曲勤凤;王瑞元;;PCR法检测食品中大肠杆菌O157:H7[J];食品科学;2010年08期
7 徐义刚;崔丽春;李苏龙;曹际娟;姜艳春;张子群;刘新亮;;多重PCR-DHPLC检测4种主要致腹泻性大肠埃希氏菌方法的建立与应用[J];食品科学;2010年20期
8 曹际娟;闫平平;徐君怡;郑秋月;马惠蕊;谢明杰;;单核细胞增生李斯特氏菌PCR-DHPLC检测新技术的建立[J];生物技术通报;2008年S1期
9 祝儒刚;李拖平;宋立峰;;应用基因芯片技术检测肉及肉制品中5种致病菌[J];食品科学;2012年14期
10 李丁玲;任敬;马晓燕;王羽;袁耀武;;多重PCR检测食源性致病菌的研究[J];食品工业;2012年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宁喜斌;张晓艳;季爱加;张亚琼;;《食品安全学实验》教学改革的探索与实践[J];安徽农学通报(上半月刊);2011年11期
2 范远景;潘丙南;陈伟;韩明忠;程仁剑;李艳;;3M纸片检测大肠菌群法与国标快速检测法的比较研究[J];安徽农业科学;2009年01期
3 牛玉倩;高路;宋丽雅;何聪芬;;聚合酶链式反应技术快速检测化妆品中大肠杆菌的研究[J];日用化学工业;2011年05期
4 赵燕丽;许岩;张立钢;杨秀芹;邵美丽;;肉中两种致病菌的双重PCR检测方法的建立[J];东北农业大学学报;2010年12期
5 朱丽萍;颜世敢;;动物病原高通量检测技术[J];动物医学进展;2011年10期
6 黄燕琼;;沙门氏菌的检疫风险评估[J];广东农业科学;2008年07期
7 朱玲;许喜林;周彦良;芮汉明;;加工肉鸡中沙门氏菌风险评估[J];现代食品科技;2009年07期
8 袁秀金;;2010年上半年中山市糕点产品危害因素调查分析[J];现代食品科技;2010年08期
9 赵琳娜;王丹;胡凤月;吴鹏;韩月贝;杨红莲;;食用植物油中动物源性成分PCR检测方法的建立[J];现代食品科技;2012年05期
10 邵美丽;刘思国;赵燕丽;孔保华;;TaqMan探针实时定量PCR检测肉中单增李斯特菌的研究[J];东北农业大学学报;2012年08期
中国重要会议论文全文数据库 前6条
1 何永盛;;食品中有害微生物快速检测技术的研究进展[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
2 敖仁华;邹勇;李春华;周宗清;;猪霍乱沙门氏菌铝胶灭活疫苗的制备与免疫效力试验[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会2009年学术年会“回盛生物”杯全国养猪技术论文大赛论文集[C];2009年
3 敖仁华;邹勇;李春华;周宗清;;猪霍乱沙门氏菌铝胶灭活疫苗的制备与免疫效力试验[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
4 韩善桥;何立东;胡明;赵晓航;石峰;史成和;;大肠埃希菌和大肠菌群测试片在细菌感染快速检测中的应用[A];第五届全国微生物资源学术暨国家微生物资源平台运行服务研讨会论文摘要集[C];2013年
5 彭清洁;王冲;胡长敏;陈颖钰;晁金;闻晓敏;姜鹏;郭爱珍;;某肉牛养殖场肉牛大肠杆菌、志贺氏菌与牛支原体混合感染的诊断与分析[A];第四届全国牛病防制及产业发展大会论文集[C];2012年
6 张华宁;陈玉贞;侯配斌;王勤;胡光春;李心朋;王梅;毕振旺;;2012年山东省肉鸡生产加工各环节沙门菌污染水平及耐药分析[A];产业竞争力与创新驱动——2014年山东省科协学术年会论文集[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 王耀;肉制品和乳制品中致病菌检测技术体系建立及李氏菌分型鉴定与溯源研究[D];沈阳农业大学;2011年
2 杨保伟;食源性沙门氏菌特性及耐药机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
3 郭冬琴;橙汁中酵母菌的分离鉴定及其快速分子检测技术研究[D];西南大学;2012年
4 邵洪泽;羊传染性脓疱病毒FIL基因克隆表达及分子生物学检测方法的建立与初步应用[D];吉林农业大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 毛毛;肉制品热处理终点温度检测方法研究[D];中国海洋大学;2010年
2 冯阳阳;基于纳米金颗粒和蛋白A分子的压电免疫传感器在大肠杆菌O157:H7检测中的研究[D];浙江大学;2011年
3 董莉娟;HRSV纯化条件的探索及实验性疫苗免疫原性的初步评价[D];北京协和医学院;2011年
4 王沛贤;蛭弧菌HN1的生物学特性分析及控制鱼片猪霍乱沙门氏菌生长的应用[D];华南理工大学;2011年
5 李萌;噬菌体对食品加工过程沙门氏菌污染的防控研究[D];中国海洋大学;2011年
6 张莉莉;细菌总数及大肠菌群快速检测纸片的研究[D];南昌大学;2011年
7 杨丽花;链球菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和大肠埃希菌多重PCR诊断方法的建立[D];西北农林科技大学;2011年
8 何鸿举;PCR技术快速检测腐烂苹果中扩展青霉菌Penicillium Expansum[D];西北农林科技大学;2011年
9 饶星;沙门菌三种血清型鞭毛基因重组及免疫学检测方法研究[D];吉林大学;2008年
10 武小勇;基于灰度变化的牛奶菌群检测系统分析与设计[D];哈尔滨理工大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 姚赟 ,文孟良,王昌益;生物传感器的发展与市场化[J];传感器技术;1999年02期
2 黄荔;;流感疫苗在某干休所预防保健中的应用[J];东南国防医药;2010年06期
3 司梁宏;尚宁;李燕思;马静;邱彦;;十味板蓝根颗粒剂治疗上呼吸道感染的临床观察[J];东南国防医药;2011年03期
4 李林海;程颖;陈丽丹;黄晓燕;石玉玲;何洁静;王露霞;;基因芯片法鉴定血培养标本中致病菌的临床评价[J];南方医科大学学报;2009年10期
5 王洪敏;何冬梅;周辉;柯碧霞;邓小玲;朱海明;陈经雕;黎薇;杨杏芬;柯昌文;;华南地区常见的8种食源性致病菌检测基因芯片研制[J];南方医科大学学报;2010年11期
6 刘华伟,郭蔼光,马立农,邱立;PCR技术在沙门氏菌快速检测中的应用[J];动物医学进展;2004年06期
7 李文勇,刁伯民;国标法和纸片法对餐具大肠菌群检测比较[J];中国国境卫生检疫杂志;1994年06期
8 孔繁德;徐淑菲;澎海滨;陈琼;陆承平;;沙门菌实时荧光定量PCR检测试剂盒的研制与应用[J];中国国境卫生检疫杂志;2006年S1期
9 冯家望;吴小伦;王小玉;李丹琳;陈静静;唐食明;游淑珠;;多重-巢式PCR检测食品中单增李斯特菌研究[J];中国国境卫生检疫杂志;2007年01期
10 孙贵娟,林毓宁,邓其军,尹俐,梁柏玲,黄纯建;南宁市致泻性大肠杆菌病原监测与研究[J];广西医学;2000年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 杨国兴;多重PCR检测肉及肉制品中四种食源性致病菌的研究[D];河北农业大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐义刚;崔丽春;李苏龙;曹际娟;姜艳春;张子群;刘新亮;;多重PCR-DHPLC检测4种主要致腹泻性大肠埃希氏菌方法的建立与应用[J];食品科学;2010年20期
2 杨大伟;刘云国;谭乐义;周裔斌;祝素珍;王建广;贾俊涛;姜英辉;;食品中A型肉毒梭菌PCR-DHPLC检测方法的建立[J];食品工业科技;2011年06期
3 吴兴海;张云霞;杨伟克;封立平;房保海;庞国兴;曹际娟;林黎明;;NDM-1基因DHPLC快速检测体系的建立[J];食品安全质量检测学报;2011年03期
4 钱云开;苑静;高飞;王海洋;肖艳霞;张进杰;;水产品中常见5种致病菌的多重PCR-DHPLC快速检测方法的建立[J];中国卫生检验杂志;2014年14期
5 曹际娟;郑秋月;孙哲平;王秋艳;裴轶君;赵昕;;变性高效液相色谱检测乳制品和化妆品中绿脓杆菌的研究[J];食品科学;2009年06期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 赵昕;王秋艳;殷国建;于珂;郑秋月;;食品中蛔虫卵PCR—DHPLC快速检测方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
2 杨卓;龙美娟;王斐;陈倩;赵保健;郭野;张旭;崔巍;;酶切富集联合DHPLC优化检测外周血EGFR、K-RAS基因突变及其临床应用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
3 郭奕斌;陈路明;耿茜;蒋玮莹;杜传书;;DHPLC结合测序法快速检测IDS基因移码突变和错义突变[A];遗传学进步与人口健康高峰论坛论文集[C];2007年
4 郑秋月;于珂;马惠蕊;王秋艳;徐君怡;丁荷;李和义;;布鲁氏菌PCR—DHPLC检测方法的建立[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
5 陈茹;刘志玲;刘志辉;马静云;曾碧健;吴晓薇;周科;林志雄;;四种重要致病性分枝杆菌DHPLC检测鉴别方法的建立[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 王传得;致病性弧菌MPCR-DHPLC检测和分型方法的建立[D];福建农林大学;2009年
2 敖雪;研究应用DHPLC技术筛查ANPEP基因单核苷酸多态性[D];中国医科大学;2004年
3 龚小新;DHPLC法检测草酸钙尿石患者VKDC结构域基因突变[D];华中科技大学;2006年
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