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《生物工程学报》 2013年02期
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玉米、小麦、水稻原生质体制备条件优化

孙鹤  郎志宏  朱莉  黄大昉  
【摘要】:玉米Zea mays L.、小麦Triticum aestivum L.、水稻Oryza sativa L.是三大重要粮食作物,对其原生质体制备条件的优化具有重要意义。以玉米(综3)、小麦(中国春)、水稻(日本晴)10日龄幼苗为材料,研究了叶肉细胞原生质体分离过程中的酶浓度、酶解时间和离心力大小等因素对产量和活力的影响。结果表明:酶浓度和酶解时间对原生质体产量影响显著,随着酶解液浓度和酶解时间的提高,原生质体产量增加,但细胞碎片同时增多。水稻经真空处理后,原生质体产量大幅度提高。通过正交实验设计得出如下结果:玉米叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶1.5%,离析酶0.5%,50 r/min酶解7 h,100×g离心2 min收集,原生质体产量为7×106/g FW;小麦叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶1.5%,离析酶0.5%,50 r/min酶解5 h,100×g离心2 min收集,原生质体产量为6×106/g FW;水稻叶肉细胞原生质体分离的最佳条件为:纤维素酶2.0%,离析酶0.7%,50 r/min酶解7 h,1 000×g离心2 min收集,得到的原生质体产量为6×106/g FW。通过二乙酸荧光素染色发现原生质体活力均在90%以上。用PEG-Ca2+介导法将含有绿色荧光蛋白的质粒转化入原生质体,转化率可达50%~80%。
【作者单位】中国农业科学院生物技术研究所;
【基金】:国家自然科学基金(Nos.30771383,30970231)资助~~
【分类号】:S513;S512.1;S511

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