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《生物化学与生物物理学报》 2002年04期
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减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达新城疫病毒融合蛋白

方维焕  梁雪芽  
【摘要】:RT PCR扩增了新城疫病毒 (NDV)F4 8E9株的融合蛋白 (F)基因并插入到 pcDNA3的CMV启动子下游 ,构建成真核表达质粒pcDNA3 F ,高压电转化dam和 phoP基因双突变株减毒鼠伤寒沙门氏菌 (ZJ111株 ) ,并直接感染Vero细胞 ,分别提取细胞总DNA和总RNA ,DIG标记探针均可检测到阳性杂交信号。FITC标记的羊抗鸡IgG进行间接免疫荧光试验 ,可检测到特异性的黄绿色荧光。ELISA检测F蛋白结果表明 ,转染后 4 8h开始表达 ,随后逐渐增多。SDS PAGE和Western印迹可检测到 5 5kD的蛋白质条带。上述试验结果证实减毒沙门氏菌不仅可将目的基因呈递给Vero细胞 ,而且还得到了转录和表达 ,表达的F蛋白具有免疫反应性 ,为研制减毒沙门氏菌为载体的口服NDVDNA疫苗创造了条件。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 许发芝,仲大莲,余为一;新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建[J];安徽农业大学学报;2003年03期
2 梁雪芽,方维焕,江玲丽;鸡新城疫口服DNA疫苗的安全性、稳定性与免疫效力[J];生物工程学报;2003年01期
3 李龙,方维焕,樊拥军,许健,方立,李建荣,于涟;减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因[J];生物工程学报;2004年03期
4 陈雪燕,JOHN M.Dikki,江玲丽,帅江冰,方维焕;重组质粒在减毒沙门氏菌中的稳定性及其对细菌侵袭力的影响[J];微生物学报;2005年05期
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年
2 杜爱芳;鸡球虫病的中药防治与DNA疫苗研究[D];浙江大学;2004年
3 戴贤君;减毒沙门氏菌为载体的生长抑素DNA疫苗构建、表达及对草鱼生长影响研究[D];浙江大学;2005年
4 孙蕾;外源基因插入不同复制非必需区影响重组鸡痘病毒抵抗母源抗体干扰的能力[D];扬州大学;2005年
5 秦卓明;新城疫病毒流行株致病性和抗原性及其与F和HN基因变异的相关性[D];山东农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前5条
1 乔红伟;猪霍乱沙门菌疫苗株介导的猪瘟基因疫苗及实验免疫研究[D];新疆农业大学;2003年
2 丁炜东;表达新城疫病毒F、HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验[D];扬州大学;2003年
3 张体银;表达ZJ-1株新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的筛选及其免疫效力试验[D];扬州大学;2004年
4 李军伟;表达新城疫病毒HN基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[D];扬州大学;2004年
5 孟凡臣;鸡新城疫F抗原蛋白基因植物表达载体的构建及转化马铃薯的研究[D];首都师范大学;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 仲大莲,余为一,刘兢,李向明,郭霄峰;新城疫病毒(NDV)HN基因真核表达重组质粒的构建[J];安徽农业大学学报(自然科学版);2002年01期
2 许发芝,仲大莲,余为一;新城疫病毒(NDV)F基因的克隆及其真核表达重组质粒的构建[J];安徽农业大学学报;2003年03期
3 徐秀龙,刘秀梵;抗鸡新城疫病毒单克隆抗体及所测定的毒株的抗原差异[J];病毒学报;1988年01期
4 王志玉;副粘病毒融合蛋白活性位点中亮氨酸基因突变分析[J];病毒学报;2000年01期
5 李建荣,于涟,黄耀伟,梁雪芽,孟松树,谢荣辉;免疫刺激复合物(ISCOM)介导的传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因免疫的研究[J];病毒学报;2001年04期
6 吴艳涛,倪雪霞,万洪全,刘文博,刘秀梵;我国部分地区不同动物来源新城疫病毒的分子流行病学研究[J];病毒学报;2002年03期
7 程坚,刘秀梵,彭大新,刘红旗,吴艳涛,张如宽;共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J];病毒学报;2003年01期
8 黄勇,万洪全,刘红旗,吴艳涛,刘秀梵;鹅源新城疫病毒ZJ1株全基因组的序列测定[J];病毒学报;2003年04期
9 王志玉;任桂杰;温红玲;宋艳艳;王桂亭;姚苹;许洪芝;张文强;;新城疫病毒F蛋白细胞融合活性位点中保守氨基酸基因突变分析[J];病毒学报;2006年01期
10 杨永平,江永珍,毕胜利,刘崇柏;丙型肝炎病毒基因组C区和NS3区基因cDNA的融合及其在大肠杆菌中的表达与初步应用[J];病毒学报;1994年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 倪雪霞;我国部分地区新城疫病毒融合蛋白基因和分子流行病学的初步研究[D];扬州大学;2002年
2 苏俊峰;Bt抗虫基因导入马铃薯的遗传转化研究[D];东北农业大学;2004年
3 魏广丽;干酪乳杆菌表面展示表达TGEV-S抗原表位及其免疫原性分析[D];黑龙江八一农垦大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 贾伟新,曹伟胜,廖明,张桂红,辛朝安;禽用核酸疫苗的研究进展[J];动物医学进展;2004年03期
2 刘国霞,姜宇,张斌,张煜,柳絮,范仲学,钱凤芹;动物核酸疫苗研究进展[J];动物医学进展;2005年09期
3 李龙,方维焕,樊拥军,许健,方立,李建荣,于涟;减毒沙门氏菌为载体在Vero细胞中表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白基因[J];生物工程学报;2004年03期
4 孙一敏,于秀俊,柏佳宁,孙继国,赵宝华;NDV HeB02分离株的生物学特性及其F基因的克隆与序列测定[J];微生物学通报;2004年04期
5 郭明明;;兽用核酸疫苗的研究进展[J];畜牧与兽医;2006年05期
6 张体银;孙蕾;刘武杰;刘秀梵;;表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性[J];中国预防兽医学报;2006年04期
7 张小荣,焦新安,潘志明,张晓明,黄金林,张如宽,刘秀梵;以减毒鼠伤寒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的安全性与免疫效力[J];中国兽医学报;2004年06期
8 戴贤君,方维焕;减毒沙门氏菌为载体的草鱼口服生长抑素DNA疫苗的构建及其稳定性[J];中国兽医学报;2005年04期
中国博士学位论文全文数据库 前9条
1 马有智;猪链球菌溶血素基因的克隆及其原核和真核表达[D];浙江大学;2003年
2 程相朝;新城疫病毒地方株分子流行病学调查及其疫病控制[D];南京农业大学;2003年
3 潘志明;重组减毒细菌运送CD8~+T细胞表位的机理及携带新城疫病毒DNA 疫苗鼠伤寒沙门氏菌的免疫生物学特性研究[D];扬州大学;2004年
4 杜爱芳;鸡球虫病的中药防治与DNA疫苗研究[D];浙江大学;2004年
5 戴贤君;减毒沙门氏菌为载体的生长抑素DNA疫苗构建、表达及对草鱼生长影响研究[D];浙江大学;2005年
6 秦卓明;新城疫病毒流行株致病性和抗原性及其与F和HN基因变异的相关性[D];山东农业大学;2006年
7 王瑞琳;SARS冠状病毒分离鉴定、疫苗构建及免疫血清制备研究[D];吉林大学;2006年
8 徐引弟;猪霍乱沙门氏菌C500株crpˉ、asdˉ缺失株平衡致死系统的构建及应用[D];华中农业大学;2006年
9 舒邓群;核酸佐剂GM-CSF的克隆及其对生长抑素DNA疫苗的免疫增强作用[D];南京农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈光明;NDV HN基因核酸疫苗的制备及其免疫效果的观察[D];安徽农业大学;2004年
2 焦凤超;减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒口服DNA疫苗的免疫效力研究[D];扬州大学;2005年
3 夏晓莉;表达鸡传染性喉气管炎强毒gB基因的重组鸡痘病毒的构建及其免疫效力[D];扬州大学;2006年
4 黎铭;狂犬病新型口服疫苗—糖蛋白表达质粒的构建以及表达细菌的筛选[D];广西大学;2006年
5 白志坤;鸡新城疫病毒F、HN基因的真核表达及免疫效力研究[D];东北农业大学;2006年
6 胡拥军;农杆菌介导新城疫病毒Lasota株HN基因在苜蓿表达研究[D];西南大学;2007年
7 董建宝;新城疫病毒广西分离株DNA疫苗的构建、动物免疫试验及体内分布的研究[D];广西大学;2007年
8 翟文栋;鸭新城疫病毒的分离鉴定及其致病性研究[D];河北农业大学;2007年
9 曹文尧;丹毒丝菌表面保护抗原A作为重组亚单位疫苗和核酸疫苗的初步研究[D];新疆大学;2007年
10 沈艳;猪链球菌2型小型猪感染模型的建立及相关免疫指标的检测[D];上海交通大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘胜兵;王从荣;;禽流感与粘膜免疫[J];生物学通报;2011年03期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 余祖华;程相朝;丁轲;张春杰;李银聚;吴庭才;刘河冰;;新城疫病毒洛阳分离株HN基因真核表达载体的构建[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
2 张小荣;焦新安;潘志明;张晓明;刘秀梵;;以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性[A];2005全国第二届核酸疫苗研讨会论文集[C];2005年
3 潘志明;焦新安;黄金林;殷月兰;唐丽华;张辉;张晓明;张小荣;刘秀梵;;携带新城疫病毒DNA疫苗的鼠伤寒沙门氏菌及其安全性与免疫效力[A];中国畜牧兽医学会2006学术年会论文集(下册)[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 徐灿;幽门螺杆菌尿素酶B和黏附素A核酸疫苗的研究[D];第二军医大学;2004年
2 John M.Dikki;减毒沙门氏菌为载体的原核与真核表达和鸡新城疫病毒表面糖蛋白基因免疫研究[D];浙江大学;2005年
3 李彦锋;重组鼠精子抗原疫苗株的构建及其避孕效应研究[D];第三军医大学;2001年
4 林华;PRRSV变异株的分离鉴定、鉴别诊断和新型基因疫苗的研究[D];四川农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 万俊杰;减毒沙门氏菌介导的禽呼肠孤病毒σB/σC基因疫苗的构建及其免疫特性研究[D];四川农业大学;2011年
2 张辉;减毒沙门氏菌运送CD8~+T细胞表位的细胞免疫应答规律研究[D];扬州大学;2005年
3 王存伟;减毒沙门氏菌介导的禽呼肠孤病毒σC基因疫苗的构建及其免疫特性的初步研究[D];四川农业大学;2009年
4 吴卫东;近年来NDV流行株F基因序列分析和NDV N_(88)毒株单抗的初步研制[D];扬州大学;2005年
5 符芳;新城疫病毒La Sota株F和HN基因的克隆表达及免疫原性分析[D];河北农业大学;2006年
6 姚碧涛;流感病毒DNA疫苗的构建及免疫效果的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
7 姜娜;一种新型减毒沙门氏菌疫苗载体的构建[D];中国人民解放军军事医学科学院;2009年
8 徐亮;伪狂犬病病毒IE180基因的克隆、原核表达及其以减毒沙门氏菌为载体的口服DNA疫苗免疫效力研究[D];四川农业大学;2009年
9 梁雪芽;减毒沙门氏菌作为鸡新城疫口服DNA疫苗载体的基因免疫研究[D];浙江大学;2002年
10 刘东升;幽门螺杆菌BabA2/UreI融合基因减毒伤寒沙门氏菌重组活载体疫苗的构建与鉴定[D];南昌大学;2007年
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