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《生物化学与生物物理进展》 2005年09期
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一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立

张驰宇  徐顺高  黄新祥  
【摘要】:为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张驰宇;成婧;李全双;曹威;孙金燕;;荧光实时定量PCR的研究进展[J];江苏大学学报(医学版);2006年03期
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 邱妍;四种中药多糖增强免疫和抗病毒作用及机理研究[D];南京农业大学;2007年
2 周东波;pll-DCIONP介导野生型p53基因转染对耐顺铂肺腺癌靶向治疗和耐药影响的研究[D];中南大学;2007年
3 井文倩;赖氨酸对新西兰兔生长和繁殖性能的影响及其分子机制初探[D];山东农业大学;2007年
4 谢轶;铜绿假单胞菌噬菌体、QS系统与生物被膜的相关研究[D];四川大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 包宇;淫羊藿总黄酮对肾阳虚小鼠肾脏和性腺雄激素受体基因表达的影响[D];陕西师范大学;2007年
2 王俊红;NO及SA信号分子诱导植物抗逆调控基因的动态研究[D];甘肃农业大学;2007年
3 朱爱华;洛克沙胂诱导斑马鱼组织中HSP70表达的研究[D];扬州大学;2007年
4 顾燕娟;支链淀粉合成相关基因等位基因间的差异对稻米淀粉理化特性的影响[D];扬州大学;2006年
5 徐田枚;莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)Nfr-4突变株的突变性质分析[D];新疆大学;2007年
6 刘斌;辐射可诱导基因Gadd45和p21~(WAF1)作为辐射生物剂量计的实验室评估[D];中国人民解放军军事医学科学院;2007年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 徐顺高,黄新祥,周丽萍;荧光实时定量RT-PCR观察伤寒杆菌鞭毛z66和d/j抗原基因表达方法的建立[J];江苏大学学报(医学版);2005年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 张明辉;敖金霞;曲波;高学军;;大豆深加工产品两种荧光定量PCR检测方法的比较研究[J];生物技术;2006年02期
2 张驰宇;成婧;李全双;曹威;孙金燕;;荧光实时定量PCR的研究进展[J];江苏大学学报(医学版);2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 骆方军;吕建新;;TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎IL-2Rá mRNA检测的应用价值[A];浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 刘斌;荧光分子探针技术在基因表达产物研究中的应用[D];湖南大学;2007年
2 陈文政;前列腺良、恶性细胞分泌蛋白差异表达研究[D];第二军医大学;2007年
3 熊玮;α1肾上腺素受体阻滞剂用于输尿管结石排石治疗[D];四川大学;2007年
4 王春霞;常通口服液对肠粘连的分子作用机制研究[D];南方医科大学;2007年
5 冯永淼;过量维生素A对肉仔鸡骨骼钙磷代谢影响及机理的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
6 唐博;蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素(sBD-1)表达的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
7 吴爱群;食管神经和递质对食管癌细胞增殖与分化的作用及其机制[D];郑州大学;2007年
8 孙立;抗戾饮对呼吸道冠状病毒感染模型影响的实验研究[D];广州中医药大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 郑爱荣;营养水平对初产母猪妊娠早期胚胎存活和Leptin分泌及基因表达的影响[D];四川农业大学;2007年
2 包宇;淫羊藿总黄酮对肾阳虚小鼠肾脏和性腺雄激素受体基因表达的影响[D];陕西师范大学;2007年
3 秦君;中药王不留行主要成分对小鼠乳腺上皮细胞功能的影响[D];东北农业大学;2007年
4 王俊红;NO及SA信号分子诱导植物抗逆调控基因的动态研究[D];甘肃农业大学;2007年
5 贝峰;多重荧光PCR检测产vero毒素大肠杆菌(VTEC)方法的研究及初步应用[D];山东农业大学;2007年
6 顾燕娟;支链淀粉合成相关基因等位基因间的差异对稻米淀粉理化特性的影响[D];扬州大学;2006年
7 韦信贤;广西三黄鸡抗马立克氏病相关分子遗传学标记的筛选研究[D];广西大学;2007年
8 贾岩龙;杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶突变株的制备和鉴定[D];郑州大学;2005年
9 刘波;实时RT-PCR法检测非小细胞肺癌淋巴微转移[D];山东大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李光伟;刘和;张峰;堵国成;陈坚;唐德友;李秀芬;;荧光定量PCR监测五氯酚对好氧颗粒污泥和活性污泥中氨氧化细菌数量的影响[J];微生物学报;2007年01期
2 黄强;;胶质瘤生成细胞及其在胶质瘤起源中的作用[J];中华神经外科杂志;2006年12期
3 李凡,石艳春,李毅,李中秋,张绍伦;啤酒酵母多糖对小鼠免疫细胞功能的影响[J];白求恩医科大学学报;1998年02期
4 孔祥峰,胡元亮,王德云,李祥瑞,刘家国,张宝康,邱妍;中药成分与新城疫病毒感作后对病毒感染活性的影响[J];南京农业大学学报;2004年02期
5 孙伟,李静,韩志武;螺旋藻多糖对小鼠腹腔巨噬细胞游离Ca~(2+)浓度的影响[J];中国药房;2000年05期
6 丁雁,邢善田,周金黄;淫羊藿多糖促进小鼠T和B细胞~3H-TdR掺入和诱生干扰素作用的研究[J];中国免疫学杂志;1985年06期
7 蒋淑君,许兰芝;淫羊藿总黄酮的药理作用研究进展[J];中医药学报;2004年04期
8 陈骅;黄强;董军;兰青;;肿瘤起源细胞学说与争论[J];癌症;2006年06期
9 黄强;胶质瘤干细胞与神经干细胞研究进展[J];实用肿瘤杂志;2004年04期
10 黄强;董军;朱玉德;张全斌;季晓燕;王爱东;兰青;;人脑胶质瘤组织中分离与培养肿瘤干细胞[J];中华肿瘤杂志;2006年05期
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 赵锋;小鼠乳腺中胰岛素样生长因子家族的表达和作用[D];东北农业大学;2006年
2 胥清富;生长激素作用的靶基因在猪肝脏和肌肉上的表达及调控[D];南京农业大学;2002年
3 陈志敏;肉鸡动态生长模型的建立及相关参数的研究[D];中国农业科学院;2004年
4 许宁一;低氧等应激对大鼠GH-IGF-I轴的作用及其调控机制[D];浙江大学;2004年
5 张世红;胰岛素和胰岛素样生长因子系统及血管内皮生长因子在PCOS发病机制中的作用[D];吉林大学;2006年
6 姜华武;水稻胚乳淀粉合成相关基因克隆与高温影响稻米品质的分子生理学机制研究[D];浙江大学;2003年
7 韩月澎;稻米淀粉合成相关基因对品质的影响及分支酶基因Sbe1、Sbe3克隆与分析[D];扬州大学;2004年
8 李学如;铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的分子机制研究[D];四川大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 胡昌泉;转二个淀粉合成相关基因籼稻的获得及其后代的初步研究[D];福建农林大学;2003年
【二级引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 李源;杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因与子痫前期相关性的研究[D];吉林大学;2007年
2 谢承志;新疆塔里木盆地周边地区古代人群及山西虞弘墓主人DNA分析[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 杨占清;粘蛋白1、粘蛋白2 mRNA在炎症性肠病大鼠肠粘膜细胞表达规律的研究[D];吉林大学;2007年
2 雷姗姗;PCR检测大鼠血液及腹水中细菌DNA对肠道吻合口漏的早期诊断价值[D];中南大学;2007年
3 刘芬;冷应激反应下猪脂肪组织瘦素、脂联素、抵抗素mRNA表达水平的研究[D];吉林大学;2007年
【相似文献】
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1 张驰宇,张高红,杨敏,贲昆龙;四步法消除SYBR GreenⅠ实时定量RT-PCR中引物二聚体的影响[J];中国生物化学与分子生物学报;2004年03期
2 张驰宇,徐顺高,黄新祥;一种新颖简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法的建立[J];生物化学与生物物理进展;2005年09期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 王莹;马春红;;SLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
2 赵洁敏;吴昌平;王荣朝;许军;朱江;魏江;罗光华;朱一蓓;;荧光实时定量RT-PCR法检测B7-H3 mRNA在胃癌组织中的表达及其与T淋巴细胞亚群的关系[A];江苏省抗癌协会化疗专业委员会第六届年会、中日肿瘤治疗研讨会暨第二届全国肿瘤化疗进展学习班论文汇编[C];2006年
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1 白巨利;二氧化硫对大鼠基因表达谱、细胞凋亡及癌变相关基因表达的影响[D];山西大学;2006年
2 吴洪恺;水稻淀粉合成相关基因对稻米食味品质影响的研究[D];扬州大学;2006年
3 毛洪鸾;Smac/DIABLO调节TRAIL或紫杉醇诱导卵巢癌耐药细胞凋亡的研究[D];山东大学;2007年
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1 王玲莉;GSM 1800 MHz射频电磁场候选反应基因分析[D];浙江大学;2006年
2 王莹;SLE患者外周血单个核细胞Tim-1及Tim-3基因的表达以及人Tim-3基因的克隆[D];山东大学;2006年
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