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《上海第二医科大学学报》 2004年09期
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柯萨奇-腺病毒受体基因的原核表达和多克隆抗体制备

吴赟  陈洪  黄孝天  陈宏新  刘晶星  
【摘要】:目的利用原核基因工程克隆表达柯萨奇-腺病毒受体(CAR)胞外段,并制备多克隆抗体。方法从HeLa细胞中抽提总RNA,通过RT-PCR获得编码CAR胞外段的cDNA,与pQE31质粒连接,构建表达型重组质粒,测序证实后诱导表达,经Ni-NTA柱亲和纯化后,免疫新西兰兔,ELISA检测抗血清滴度。结果重组质粒转化的大肠杆菌M15经IPTG诱导表达及亲和纯化后得到滴度较高的融合蛋白,SDS-PAGE和Western blot显示其分子量约为26 kd,具有特异的抗原性,主要以包涵体形式存在于菌体中。纯化的融合蛋白免疫新西兰兔后产生的抗体,经ELISA检测抗体滴度1:32 000。结论CAR胞外段基因的克隆表达和多克隆抗体的制备,为进一步研究该受体在以腺病毒载体为基础的基因治疗中的作用及柯萨奇病毒的致病机制奠定了基础。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前2条
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2 吴赟;郑辉;陈宏新;黄孝天;沈佐君;刘晶星;;CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年03期
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 任鹏康;韦芳;李惠明;王丰;张巨峰;陈霞芳;李宗海;黄倩;;肿瘤细胞表面柯萨奇病毒-腺病毒受体与5型腺病毒感染效率的关系[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2006年03期
2 李哲;周密;李凡;;柯萨奇B3病毒VP1基因序列及系统发生树分析[J];中国老年学杂志;2007年03期
3 毕胜利;曲萌;陈廷友;宋玉国;;柯萨奇B3病毒VP1基因在原核中的表达及其临床意义[J];中国免疫学杂志;2007年09期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘霞;冯婷;赵继敏;李沛;黄幼田;杨洪艳;赵明耀;董子明;;抑制Raf-MEK-ERK信号传导途径上调食管癌细胞株EC9706柯萨奇-腺病毒受体的表达[J];重庆医学;2010年19期
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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5 浦昀;新型多金属氧酸盐抗甲型流感病毒药效学研究[D];吉林大学;2005年
6 张巍;CNTF基因眼内转移治疗大鼠视神经损伤的实验研究[D];第三军医大学;2005年
7 郭寿贵;人低氧诱导因子1α及其突变型重组腺病毒载体的构建[D];第一军医大学;2005年
8 周及红;莪术油眼用凝胶治疗病毒性角膜炎的药效学研究[D];吉林大学;2006年
9 李敏然;腺病毒介导HBV载体表达双靶位shRNA抑制HBV转基因小鼠体内HBV表达的研究[D];河北医科大学;2007年
10 雷锋锐;Ad-VEGF165的构建及体外转染大鼠骨髓源性血管内皮祖细胞的基础研究[D];苏州大学;2008年
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