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《热带作物学报》 2009年10期
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宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立

王恒波  郭晋隆  陈平华  阙友雄  陈如凯  许莉萍  
【摘要】:利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板。通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程。本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考。

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 苏丽娟;董晓慧;尹新明;;赤拟谷盗HSP70基因克隆和竞争定量PCR检测[J];昆虫学报;2011年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 韩广涛;双重PCR和竞争性PCR检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌技术体系建立[D];河北农业大学;2011年
2 周丹;甘蔗宿根矮化病病原菌Lxx18460基因的克隆和表达分析[D];广西大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
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4 徐景升;许莉萍;阙友雄;高三基;陈如凯;;甘蔗宿根矮化病研究进展[J];热带亚热带植物学报;2008年02期
5 邓展云,王伯辉,刘海斌,朱秋珍,李鸣,王维赞,谭裕模;广西甘蔗宿根矮化病的发生及病原检测[J];中国糖料;2004年03期
6 王孟春,蓝东芝,李岩,古田隆久;幽门螺杆菌感染者胃粘膜中白介素-8 mRNA的竞争RT-PCR检测[J];中国医科大学学报;1998年04期
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8 李巍,杜传书;重组PCR构建bcr-abl mRNA竞争RT-PCR内标物[J];中华医学遗传学杂志;1998年03期
9 栾春光,马林,郝彦玲,朱本忠,罗云波;玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测[J];郑州工程学院学报;2004年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马建;魏益凡;厉志;王丕武;;植物RNA干扰表达载体构建方法的研究[J];安徽农业科学;2009年18期
2 徐景升;阙友雄;李峰;陈如凯;;35S启动子定量PCR非同源竞争模板的构建[J];河北农业大学学报;2007年05期
3 邱育淼;黄义德;张彦定;;双内标PCR-ELISA定量检测技术的建立[J];第四军医大学学报;2007年07期
4 沈万宽;邓海华;陈仲华;陈子京;;粤北翁源蔗区甘蔗宿根矮化病调查[J];广东农业科学;2009年01期
5 杨湛端;刘睿;沈万宽;陈仲华;邓海华;;番禺果蔗宿根矮化病调查及分析[J];广东农业科学;2012年09期
6 廖咏梅;张君成;王忠文;;植物病原细菌的分类地位及其在农科本科教学中的应用[J];广西农业生物科学;2007年S1期
7 颜梅新;黄伟华;黄诚华;邓展云;韦金菊;潘雪红;魏吉利;商显坤;;PCR技术在甘蔗病害检测中的应用[J];广西农业科学;2010年12期
8 陈明辉;杨丽涛;谢晓娜;刘光玲;孙富;杨建波;李杨瑞;;甘蔗宿根矮化病研究进展[J];南方农业学报;2011年03期
9 罗莲凤;韦持章;唐君海;;甘蔗宿根矮化病检测技术研究进展简述[J];农业研究与应用;2011年06期
10 邓展云;刘海斌;朱秋珍;王伯辉;王维赞;谭裕模;;健康种苗防治甘蔗宿根矮化病产量对比试验[J];甘蔗糖业;2005年06期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 沈万宽;邓海华;陈仲华;陈子京;;粤北翁源蔗区甘蔗宿根矮化病调查[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2009年
2 姜中毅;猪传染性肝炎病毒的基因克隆及分子特征研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 刘冬梅;幽胃康治疗幽门螺杆菌相关性胃炎的临床与实验研究[D];山东中医药大学;2001年
4 杨家大;应用实时荧光定量方法研究实验用小型猪细胞色素P450的表达[D];四川农业大学;2007年
5 汪长寿;绵羊毛囊培养方法的建立及雌二醇对毛囊Bcl-2、Bax表达的影响[D];内蒙古农业大学;2008年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩广涛;双重PCR和竞争性PCR检测马铃薯环腐病菌和黑胫病菌技术体系建立[D];河北农业大学;2011年
2 梅进;新型特矮稻基因定位和赤霉素代谢关键酶基因表达分析[D];湖南大学;2009年
3 虞燕萍;幽门螺杆菌感染儿童胃十二指肠粘膜IL-8及IL-8mRNA的研究[D];浙江大学;2003年
4 栾春光;大豆、玉米转基因成分的竞争定量PCR检测[D];中国农业大学;2003年
5 黄永才;抗菌肽基因合成与植物表达载体的构建[D];广西大学;2006年
6 刘怀鄂;乙肝病毒基因型与临床相关性研究[D];昆明医学院;2007年
7 田勇刚;HBV感染者血清cccDNA与病毒复制及肝组织损伤的关系[D];青岛大学;2006年
8 马静静;黄瓜4种α-半乳糖苷酶的Southern杂交及表达分析[D];扬州大学;2008年
9 王恒波;转基因生物产品PCR检测体系建立[D];福建农林大学;2008年
10 关晶岩;原料乳中嗜冷菌的PCR快速计数方法的研究[D];东北农业大学;2009年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 沈万宽;邓海华;陈仲华;陈子京;;粤北翁源蔗区甘蔗宿根矮化病调查[J];广东农业科学;2009年01期
2 叶巍,方筠;竞争性核酸定量检测技术研究进展[J];中国国境卫生检疫杂志;2003年01期
3 陈明辉;杨丽涛;谢晓娜;刘光玲;孙富;杨建波;李杨瑞;;甘蔗宿根矮化病研究进展[J];南方农业学报;2011年03期
4 邓展云,王伯辉,刘海斌,朱秋珍,王维赞,谭裕模,王伦旺;广西甘蔗宿根矮化病研究初报[J];广西蔗糖;2003年03期
5 高荣凯;;免疫捕捉PCR技术及其应用[J];国际免疫学杂志;2006年04期
6 伍承芳;黄孟群;;我国大陆发现甘蔗宿根矮化病[J];甘蔗糖业;1986年07期
7 黄孟群;肖镇杰;;广东甘蔗宿根矮化病调查报告[J];甘蔗糖业;1987年06期
8 郑加协,甘勇辉;福建甘蔗宿根矮化病的发生及其诊断[J];甘蔗糖业;1998年05期
9 陈仲华;沈万宽;;利用热水处理结合心叶愈伤组织培养脱除甘蔗宿根矮化病菌研究[J];甘蔗糖业;2007年05期
10 司兴奎;张济培;陈建红;顾万军;;猪IL-12p40竞争定量RT-PCR检测方法的建立[J];华南农业大学学报;2008年04期
【二级引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 谢苗;氟虫腈胁迫下小菜蛾生理生化及基因表达变化[D];福建农林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 田琴;马铃薯早疫病危害损失评估与化学防治技术的研究[D];河北农业大学;2012年
2 庞春杰;豆卜馍夜蛾热休克蛋白Hsp70与Hsc70基因的克隆及原核表达[D];东北农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邓展云,王伯辉,刘海斌,朱秋珍,王维赞,谭裕模,王伦旺;广西甘蔗宿根矮化病研究初报[J];广西蔗糖;2003年03期
2 伍承芳;黄孟群;;我国大陆发现甘蔗宿根矮化病[J];甘蔗糖业;1986年07期
3 黄孟群;肖镇杰;;广东甘蔗宿根矮化病调查报告[J];甘蔗糖业;1987年06期
4 郑加协,甘勇辉;福建甘蔗宿根矮化病的发生及其诊断[J];甘蔗糖业;1998年05期
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6 徐其放,朱苏文,常弘;玉米种子基因组DNA提取及RAPD分析[J];中山大学学报(自然科学版);2003年05期
7 李巍,杜传书;白血病 BCR-ABL 融合基因逆转录 PCR 检测中的实验因素探讨[J];中山医科大学学报;1997年02期
8 缪晓辉,戚中田;HBV基因定量分析技术的原理和方法[J];肝脏;1999年01期
9 徐景升,姚伟,余爱丽,张木清,陈如凯;微量大豆种子基因组DNA的快速制备[J];植物生理学通讯;2004年05期
10 栾春光,马林,郝彦玲,朱本忠,罗云波;玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测[J];郑州工程学院学报;2004年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 栾春光,马林,郝彦玲,朱本忠,罗云波;玉米转基因成分的非同源模板竞争定量PCR检测[J];郑州工程学院学报;2004年01期
2 阙友雄;徐景升;许莉萍;高三基;陈如凯;;福州地区甘蔗宿根矮化病致病菌Leifsonia xyli subsp. Xyli PCR检测[J];福建农业学报;2008年04期
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6 黄永棠;;应用血清技术诊断甘蔗宿根矮化病的研究[J];甘蔗糖业;1992年02期
7 J.E.Irvine;林约西;;甘蔗宿根矮化病的检验[J];甘蔗糖业;1980年07期
8 郑加协,甘勇辉;福建甘蔗宿根矮化病的发生及其诊断[J];甘蔗糖业;1998年05期
9 李文凤;王晓燕;黄应昆;卢文洁;罗志明;;云南甘蔗宿根矮化病调查及种茎温水处理脱菌效果检测[J];植物病理学报;2010年05期
10 伍承芳;;甘蔗宿根矮化病简介[J];甘蔗糖业;1980年11期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 秦碧霞;莫磊兴;魏源文;黄金玲;谢玲;蔡健和;刘志明;陆秀红;;巢式PCR检测甘蔗宿根矮化病病原[A];中国植物病理学会2010年学术年会论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 邓立国;我区甘蔗茎尖脱毒健康种苗大规模生产配套技术达世界先进水平[N];广西日报;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 周丹;甘蔗宿根矮化病病原菌Lxx18460基因的克隆和表达分析[D];广西大学;2012年
2 栾春光;大豆、玉米转基因成分的竞争定量PCR检测[D];中国农业大学;2003年
3 王恒波;转基因生物产品PCR检测体系建立[D];福建农林大学;2008年
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