宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法建立

王恒波郭晋隆陈平华阙友雄陈如凯许莉萍

【摘要】：利用宿根矮化病菌的特异检测引物,构建竞争定量PCR检测的非同源模板,建立宿根矮化病菌的竞争定量PCR检测方法。实验中非同源模板(竞争模板)构建是采用PCR方法对大肠杆菌基因组进行低严谨度扩增,回收合适的DNA片段并将其构建到T-esay载体上,通过测序和序列比对,除两端引物序列完全相似外,其余部分没有同源性,因此可以作为定量检测的非同源模板。通过计算非同源模板的拷贝数,进行竞争定量PCR检测宿根矮化病,建立宿根矮化病菌的标准竞争曲线和直线回归方程。本研究建立的竞争定量PCR检测方法操作简单、特异性和敏感性高,适合于宿根矮化病菌的检测,并可为其它病菌竞争定量PCR检测方法的建立提供参考。

【作者单位】：福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室;
【关键词】： 甘蔗宿根矮化病 宿根矮化病菌 非同源模板 竞争定量PCR 检测方法 竞争模板 靶序列 方法建立 直线回归方程 大肠杆菌基因
【基金】：现代农业产业技术体系建设专项资金(No.nycytx-24) 农业部引进国际先进农业科学技术计划(948计划)项目(No.2006-G37) 国家“863”计划项目(No.2007AA100701) 福建省科技计划重点项目(No.2007I0036) 福建省自然科学基金项目(No.2009J05050) 福建科技项目备案(No.F2007AA100701)资助
【分类号】：S435.661
【正文快照】：

甘蔗宿根矮化病(ratoon stuning disease,RSD)是世界各甘蔗产区普遍发生的一种甘蔗细菌性病害[1]。该病是由一种棒杆细菌(Clavibacter xyli subsp.xyli)寄生于蔗株的维管束中引起,主要通过带病蔗种和收获时砍种刀具相互传播[2]。Davis等研究表明,该菌不易分离培养,为革兰氏阳

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