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《热带医学杂志》 2006年01期
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大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒重组体构建

钟建辉  邱鹏新  颜光美  
【摘要】:目的构建大鼠DNA多聚酶β基因克隆及其腺病毒介导的表达载体。方法提取大鼠脑组织总RNA,用逆转录PCR扩增DNA多聚酶β(POLB)的编码区,与T载体连接,作DNA测序后,酶切POLB基因并连入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。酶切鉴定,重组腺病毒质粒(pAd-polb)和Lipofectamine2000转染293细胞,用293细胞扩增重组腺病毒。结果 8个TA克隆中有2个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLB cDNA序列完全一致。DNA序列正确的POLB重组腺病毒质粒 Ad-polb转染293细胞后,荧光显微镜下可见绿色荧光。结论用TA克隆和AdEasy系统,成功构建了大鼠 DNA多聚酶β的腺病毒重组体。

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