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《中国热带医学》 2017年07期
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家蚕蚕蛹基因LOC101743840的原核表达、免疫学鉴定及生物信息学分析

梁志林  刘晓宇  刘志刚  陈献雄  
【摘要】:目的原核表达家蚕蚕蛹LOC101743840(以下简称LOC)基因,鉴定LOC蛋白的免疫学特性,并进行生物信息学分析。方法将合成的家蚕蚕蛹LOC基因(gi|512917985)连接至克隆载体p MD18-T,用限制性内切酶Xho I和Bam H I分别对p MD18-T-LOC阳性质粒与原核表达载体p ET-28a双酶切,构建重组表达质粒p ET-28a-LOC并转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达(经IPTG诱导);用Western blot鉴定重组LOC蛋白的免疫活性;用Clustalw2和MEGA5工具包分析LOC的基因;用Prot Param Tools预测LOC蛋白的理化性质;用PSIPRED和SWISS-MODEL预测其蛋白质结构。用IEDB、Preprod和DNAStar预测其细胞抗原表位。结果成功表达了家蚕蚕蛹LOC基因,其开放阅读框768 bp,编码255组氨基酸;由E.coli BL21(DE3)原核表达的重组LOC蛋白为可溶性,分子量约33 k D;Western bolt结果显示重组LOC蛋白可特异性结合家蚕蚕蛹过敏患者血清中的特异性Ig E;家蚕蚕蛹LOC与脐橙螟LOC106139919(gi|913330692)蛋白的同源性为69%。系统进化树显示家蚕蚕蛹与美国白蛾亲缘关系比较近。理化性质预测结果显示LOC蛋白质不稳定。蛋白质结构预测结果显示LOC主要的结构为无规则卷曲。T细胞抗原表位预测得到8个肽段(9-17、79-87、93-102、104-115、124-132、152-160、223-231和244-251)。B细胞抗原表位预测得到个5肽段(34-49、59-74、127-142、202-217和213-228)。结论成功表达了家蚕蚕蛹LOC,并证实重组LOC蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究家蚕蚕蛹蛋白的结构成分、免疫学特性及理化性质提供了实验数据。
【作者单位】深圳大学医学部;深圳大学过敏反应和免疫学研究所;
【基金】:国家卫生部公益性行业科研专项(No.2015SQ00136) 广东省工程技术研究开发中心项目(No.2013158925) 广东省对外科技合作项目(No.2013B051000088) 深圳市科技计划基础研究项目(No.JCYJ20140828163633991、No.JCYJ20140418095735604)
【分类号】:R392
【正文快照】:
家蚕是我国历史悠久的经济昆虫,蚕蛹作为一种高蛋白食品或中药被大量食用,但家蚕也是引起I型超敏反应的主要过敏原,在我国南方有较高的发病率[1-2]。家蚕可通过吸入和接触等途径引起过敏性哮喘、过敏性鼻炎和过敏性皮炎等疾病,食用蚕蛹可导致消化系统过敏性疾病,甚至过敏性休

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