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雪花莲外源凝集素基因的克隆、序列分析和植物表达载体的构建

朱玉  吴茜  高越峰  徐鸿林  刘春明  周兆斓  朱祯  李向辉  
【摘要】:雪花莲外源凝集素对同翅目害虫有强烈的抑制作用,本研究从雪花莲叶片中分离出总RNA,通过RT-PCR方法扩增出了雪花莲外源凝集素基因,并将其克隆到pBluescriptKS(+)的EcoRⅤ位点。酶切图谱及DNA序列分析表明克隆的片段长度为484bp,包含了完整的外源凝集素的编码序列。编码多肽由157个氨基酸组成,其中包括N-端23个氨基酸组成的信号肽序列,105个氨基酸组成的成熟蛋白序列和29个氨基酸组成的C-端序列。我们从多个克隆中筛选出一个与报道序列最为接近的克隆,它们之间核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为96%和94%,我们用这个克隆构建了植物表达载体,并用于水稻和小麦的转化。

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