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《农业生物技术学报》 2019年02期
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冷应激对兔波氏杆菌感染传播的影响

刘燕  袁律峰  季权安  韦强  肖琛闻  李科  黄叶娥  鲍国连  
【摘要】:波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)是家兔(Oryctolagus cuniculus)呼吸道传染病的主要病原。本研究以新西兰实验兔为研究对象,以波氏杆菌作为致病原,冷应激为应激原,旨在明确冷应激对兔波氏杆菌感染传播的影响。90只健康的波氏杆菌阴性实验兔随机分为5组,Bb/RT组与PBS/RT组在常温(room temperature, RT)(20±2℃)同室分笼饲养,Bb/cold组与PBS/cold组在6±2℃同室分笼饲养,control/RT组常温隔离饲养。Bb/RT组与Bb/cold组的每只兔鼻腔滴注0.5 mL 4×10~9CFU/mL波氏杆菌菌液(CFU:菌落形成单位(colony forming unit));其余各组的兔鼻腔滴注0.5 mL PBS。在冷暴露开始后的第7h、12 h、24 h、3 d、7 d、12 d 6个时间采样,采用TaqMan荧光定量PCR检测兔鼻腔、气管、肺、肝脏、心脏细菌浓度,采用SYBR-Green逆转录PCR(reverse transcription, RT-PCR)检测细胞因子免疫应答水平变化。结果显示,波氏杆菌通过空气进行传播,7 h时PBS/RT组与PBS/cold组受试兔鼻腔内均检测到波氏杆菌。冷应激对在感染兔鼻腔内细菌增殖影响不显著:在各个采样时间点,Bb/RT组与Bb/cold组实验兔鼻腔内Bb浓度差异不显著,PBS/RT、PBS/cold两组差异也不显著。短期冷应激(3 d内),冷应激组气管内波氏杆菌感染繁殖速度快;冷暴露12 h时,Bb/RT组、Bb/cold组实验兔气管内Bb浓度显著高于PBS/RT组、PBS/cold组(P0.01);1 d和3 d时,4组试组两两比较仅Bb/RT组与PBS/RT组兔气管内细菌浓度差异显著(P0.05)。7 d后4组实验组兔气管内Bb浓度差异不显著。所有实验兔肺脏、肝脏、肾脏、心脏均未检测到波氏杆菌。在感染后的各检测时间点,感染兔的血液中IL-10表达均上调,但无明显趋势变化;干扰素基因(interferon-gamma, IFN-γ)和肿瘤抑制因子基因(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)表达上调,并在感染后3 d出现峰值。在同一时间点不同感染组IL-10、IFN-γ和TNF-α表达水平变化差别不显著。研究表明波氏杆菌通过空气进行有效传播感染,短期冷应激对感染兔气管内细菌感染繁殖有促进作用,鼻腔与气管为波氏杆菌感染主要入侵与定植器官,冷应激对波氏杆菌感染兔细胞因子表达并没有产生显著影响。本研究为波氏杆菌防控提供了技术依据。

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