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《农业生物技术学报》 2005年06期
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苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因的克隆、表达与活性

李海涛  姚江  郭巍  宋福平  高继国  黄大昉  张杰  
【摘要】:B-8-G和Ly30是我国自行分离的对多种重要农业害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)菌株,经PCR-RFLP鉴定均含有cry2Aa基因。根据cry2Aa全长基因序列设计特异引物,以B-8-G总DNA为模板扩增其中的cry2Aa全长基因,与大肠杆菌(Escherichiacoli)表达载体pET-21b相连接,获得含有cry2Aa全长基因的重组质粒pET2Aa,该基因在大肠杆菌BL21菌株能够正常表达65kD蛋白。通过构建Ly30总DNA文库方法从中筛选获得cry2Aa基因,将其连接至Bt-E.coli穿梭表达载体pHT315上,转化Bt无晶体突变株HD-73-中,该基因能正常表达65kD蛋白,并形成立方体状晶体。这两种基因序列已被国际Bt基因命名委员会分别正式命名为cry2Aa9和cry2Aa10。杀虫生物活性测定结果表明cry2Aa基因表达产物对黄胫小车蝗(Oedaleusinfernlis)、尖音库蚊(Culexpipiens)、黑翅伊蚊(Aedesmelanopterus)、水稻二化螟(Chilosuppressalis)和小菜蛾(Plutellaxylostella)幼虫均具有显著的毒杀作用。首次报道cry2Aa10基因表达蛋白对蝗虫、库蚊具有杀虫活性。这些基因的获得,将为高效工程菌和抗虫转基因植物的研制提供了新的基因资源。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 袁成志;高美玲;张艳馥;;Bt基因介导的大豆抗蚜虫表达载体的构建[J];安徽农业科学;2009年23期
2 张庆丽;李海涛;赵勇;高继国;;苏云金芽胞杆菌cry1Ia17基因克隆、表达的研究[J];东北农业大学学报;2011年04期
3 朱勋;吴青君;张友军;刘春光;刘岩林;余亚军;景伟;薛原;杨峰山;;小菜蛾高效Bt菌株的分离、生化特性及基因型鉴定[J];应用昆虫学报;2011年02期
4 李青;刘华梅;丁咏梅;陈振民;宋福平;张杰;;几株具有杀虫特异性的苏云金芽胞杆菌菌株的生物活性及杀虫蛋白基因型的鉴定[J];现代农业科学;2009年04期
5 秦伟;黄昆仑;贺晓云;李欣;许文涛;林希瑾;罗云波;;水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化[J];食品科学;2008年07期
6 张静涛;束长龙;宋福平;刘楠;张杰;黄大昉;;苏云金芽胞杆菌cry2Ad基因的克隆及其表达产物的活性分析[J];生物技术通报;2009年10期
7 马君兰;束长龙;刘东明;张杰;宋福平;黄大昉;;大肠杆菌中利用苏云金芽胞杆菌强启动子p1Ac指导Cry1Ac蛋白表达的特性分析[J];生物技术通报;2011年02期
8 谭芙蓉;朱军;李云艳;郑爱萍;李平;;苏云金芽胞杆菌Rpp39杀虫晶体蛋白基因的鉴定及cry2Aa12基因的克隆表达[J];微生物学报;2008年05期
9 董明;杜立新;王容燕;王金耀;曹伟平;宋健;冯书亮;;一株对鳞翅目害虫高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株基因型鉴定及新基因cry2Ah3克隆[J];应用与环境生物学报;2010年06期
10 黄天培;陈文;潘洁茹;黄志鹏;关雄;;苏云金芽胞杆菌cry2Ac4基因在大肠杆菌中的表达[J];中国农学通报;2008年09期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 潘洁茹;陈丽仙;黄天培;关雄;;荧光差异显示技术在Bt上的初步应用[A];2008年福建省科协第八届学术年会农业分会场论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前4条
1 刘贵明;苏云金芽孢杆菌YBT-1520全基因组测序和比较基因组学研究[D];浙江大学;2008年
2 谭芙蓉;四川生态区苏云金芽胞杆菌资源的筛选鉴定及其新型杀虫基因的克隆表达研究[D];四川农业大学;2008年
3 宋荣;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的C-半段对Vip3Aa7和Cry7Ba1蛋白包含体形成的影响[D];华中农业大学;2008年
4 周长梅;苏云金芽胞杆菌的筛选鉴定及新型cry基因克隆、表达的研究[D];东北农业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 张静涛;新型cry2基因克隆、表达及活性分析[D];中国农业科学院;2009年
2 何晓明;苏云金芽胞杆菌新型vip3基因克隆、表达及活性分析[D];东北农业大学;2011年
3 黄凯;转录调控因子CodY在苏云金芽胞杆菌中的作用研究[D];华中农业大学;2011年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 任莹博,宋福平,陈中义,李国勋,王勤英,黄大昉,张杰;苏云金芽孢杆菌cry1Aa14基因的分离、克隆及其表达[J];农业生物技术学报;2004年02期
2 宋福平,张杰,谢天健,杨自文,戴莲韵,李国勋;苏云金芽孢杆菌cry基因PCR-RFLP鉴定体系的建立[J];中国农业科学;1998年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 苏旭东;檀建新;张伟;林扬;;苏云金芽孢杆菌的分离与鉴定[J];安徽农业科学;2006年19期
2 于亚军;夏新莉;尹伟伦;;果树抗虫基因工程研究进展[J];北方园艺;2008年07期
3 王永,王勤英,檀建新,陆秀君,李国勋;苏云金杆菌新菌株WZ-7的PCR-RFLP分析及生物活性研究[J];河北农业大学学报;2003年03期
4 程林友,陆秀君,李国勋;对甜菜夜蛾高毒力Bt新菌株的PCR-RFLP分析及生物活性测定[J];东北农业大学学报;2005年02期
5 李先军;高继国;齐东来;李一丹;康立功;李海涛;;十株Bt野生菌杀虫晶体蛋白及基因型分析[J];东北农业大学学报;2009年09期
6 曲步云;李海涛;李明;高继国;;苏云金芽孢杆菌cry1Ac28基因的克隆及原核表达[J];东北农业大学学报;2010年10期
7 宋金柱,杨谦,赵敏;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的研究进展[J];东北林业大学学报;2005年01期
8 黄志鹏,关雄;苏云金杆菌新菌株WB9 cry1基因型的PCR-RFLP分析[J];福建农业大学学报;2001年03期
9 吴昌标;;源自动物粪便苏云金芽胞杆菌的cry基因型鉴定[J];福建农林大学学报(自然科学版);2010年01期
10 张群林;林群新;吴小凤;余洁;关雄;;源于地衣的苏云金芽孢杆菌分离及PCR-RFLP分析[J];福建师范大学学报(自然科学版);2009年04期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 周思军;大豆抗虫基因转移及其转化系统优化研究[D];东北农业大学;2000年
2 张杰;对鞘翅目害虫高毒力的Bt cry基因分离克隆和工程菌的构建[D];中国农业科学院;2000年
3 李长友;对鳞翅目害虫高毒力Bt菌株B-Hm-16和B-Pr-88的分子生物学研究[D];东北农业大学;2001年
4 宋福平;苏云金芽孢杆菌特殊异性cry基因的研究[D];东北农业大学;2001年
5 姚江;高效广谱苏云金芽孢杆菌Ly30株的分子生物学研究[D];中国农业科学院;2002年
6 陈中义;多功能质粒载体与组合Bt杀虫蛋白基因工程菌研究[D];中国农业科学院;2002年
7 戴小枫;中国植物保护科学技术发展战略研究[D];中国农业科学院;2003年
8 郑爱萍;微生物来源的防病、杀虫相关因子的分离与功能解析研究[D];四川农业大学;2004年
9 黄建安;茶树分子遗传图谱构建及多酚氧化酶基因的SNP研究[D];湖南农业大学;2004年
10 罗兰;苏去金杆菌的分离、cry/cyt基因鉴定及杀线虫活性的研究[D];西北农林科技大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 崔岩;大豆利用花粉管通道技术导入抗病虫目的基因的研究[D];东北农业大学;2000年
2 郭巍;苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因克隆及表达的研究[D];东北农业大学;2000年
3 魏蒂;PCR法鉴定苏云金芽孢杆菌菌株的杀虫晶体蛋白基因[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
4 郑大胜;苏云金芽孢杆菌对甜菜夜蛾毒性的筛选及DL-5789菌株的研究[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
5 钟万芳;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因及几丁质酶基因的克隆与特征分析[D];西南农业大学;2003年
6 任莹博;苏云金芽孢杆菌cry基因克隆表达和质粒复制区克隆的研究[D];河北农业大学;2003年
7 王永;高毒力苏云金杆菌菌株的筛选及cry2Ab基因的克隆[D];河北农业大学;2003年
8 闫敏;黄瓜枯萎病的生物防治研究[D];四川农业大学;2003年
9 李凤梅;苏云金芽孢杆菌的筛选、鉴定及其杀虫晶体蛋白cry1Ab基因的克隆[D];四川农业大学;2003年
10 刘全兰;苏云金杆菌4.0718菌株的杀虫晶体蛋白基因研究与克隆[D];湖南师范大学;2002年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 苏旭东;张伟;袁耀武;李英军;马雯;檀建新;;河北省部分地区苏云金芽孢杆菌菌株多样性的研究[J];安徽农业科学;2007年18期
2 李海燕,朱延明,马凤鸣;植物抗虫基因工程的研究进展[J];东北农业大学学报;2000年04期
3 于守江;王超;;Bt基因的克隆及植物表达载体的构建[J];东北农业大学学报;2008年07期
4 韩岚岚;宋福平;张杰;赵奎军;;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白对棉铃虫活性分析[J];东北农业大学学报;2008年08期
5 宋金柱,杨谦,赵敏;苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因的研究进展[J];东北林业大学学报;2005年01期
6 周思军,李希臣,刘昭军,刘丽艳,杨庆凯;通过农杆菌介导法将Bt(cryIA)基因导入大豆[J];大豆科学;2001年03期
7 刘尚前;王罡;季静;王萍;;农杆菌介导法将Bt基因转入大豆的研究[J];大豆科学;2007年01期
8 王晓春;王罡;季静;王萍;;用基因枪法将Bt基因转入大豆的研究[J];大豆科学;2007年02期
9 伍赠玲,邱君志,张新艳,李训波,关雄;苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因定位研究进展[J];福建农业大学学报;2004年01期
10 夏安东,蒋诗平,朱纪军,沈耀春,陆祖宏,黄文浩;绿荧光蛋白的双光子激发的荧光特性研究[J];光谱学与光谱分析;2001年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 张杰;对鞘翅目害虫高毒力的Bt cry基因分离克隆和工程菌的构建[D];中国农业科学院;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 蒋红玲;Bt杀虫基因双价植物表达载体的构建及抗虫马铃薯植株的获得[D];中国农业科学院;2001年
2 苏旭东;苏云金芽孢杆菌菌株的分离和cry基因的鉴定[D];河北农业大学;2005年
3 关夏玉;Bt PP61 cry1Ib2基因的克隆表达及其表达的蛋白对柑橘凤蝶的生物活性研究[D];福建农林大学;2008年
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曲步云;李海涛;李明;高继国;;苏云金芽孢杆菌cry1Ac28基因的克隆及原核表达[J];东北农业大学学报;2010年10期
2 赵晓燕;李纪顺;周红姿;张新建;王贻莲;魏艳丽;杨合同;;BtR05的鉴定及其对朱砂叶螨的毒力测定[J];福建农林大学学报(自然科学版);2011年04期
3 杜立新;董明;王容燕;马铭泽;王金耀;曹伟平;宋健;冯书亮;;苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株杀虫晶体蛋白基因分析[J];华北农学报;2011年04期
4 张庆丽;李海涛;赵世源;刘荣梅;赵勇;高继国;;苏云金芽胞杆菌cry1Ib6基因的克隆、表达及活性的研究[J];中国农业科技导报;2011年06期
5 谢雅晶;冯纪年;张存政;王耘;赵龙龙;刘贤进;;苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白cry2Ad2原核表达及其不同长度片段产物的杀虫活性[J];江苏农业学报;2011年06期
6 郑文;叶伟星;彭东海;孙明;;基于cry1Ac表达调控元件的苏云金芽孢杆菌表达载体构建[J];湖北农业科学;2012年02期
7 袁晓宇;许文涛;黄昆仑;罗云波;谷新晰;田洪涛;;Nisin-rbLF-N融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达[J];食品科学;2010年15期
8 金筱耘;赵爱春;李军;李镇刚;王茜龄;吴存容;余茂德;;Monellin-EGFP融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J];食品科学;2012年13期
9 李妮莎;;苏云金芽胞杆菌Cry7Ba1晶体蛋白溶解性的改良[J];武汉生物工程学院学报;2010年04期
10 周建桥;束长龙;邵高祥;李海涛;宋福平;张杰;;苏云金芽胞杆菌分离过程中无晶体芽胞杆菌的分析[J];中国生物防治学报;2011年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 宋萍;苏云金芽胞杆菌分离鉴定及对马铃薯二十八星瓢虫特异活性菌株研究[D];河北农业大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 袁晓宇;Nisin-rbLF-N融合基因的构建及其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2010年
2 王立光;苏云金杆菌cry7Ab7基因的克隆表达及融合基因和工程菌构建[D];河北农业大学;2010年
3 刘明;苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ie定向进化的研究[D];东北农业大学;2010年
4 王志鑫;苏云金芽孢杆菌菌株的分离及cry8型基因的克隆[D];河北农业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 檀建新,张杰,宋福平,陈中义,王开梅,黄大昉;苏云金芽孢杆菌cry1Ab13基因的克隆及表达研究[J];微生物学报;2002年01期
2 张杰,宋福平,李长友,陈中义,檀建新,黄大昉;对鞘翅目害虫高毒力Bt基因cry3Aa7的分离克隆及表达研究[J];中国农业科学;2002年06期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄必旺;谢宇飞;沙莉;黄志鹏;;苏云金芽孢杆菌chi36基因的克隆、表达和酶活性分析[J];热带作物学报;2011年06期
2 王利平;代林远;李鹏;;苏云金芽孢杆菌研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年09期
3 尚常花;朱顺妮;袁振宏;王忠铭;;巴夫杜氏藻β-肌动蛋白基因的克隆和分析(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2011年07期
4 向智龙;卓建华;程振涛;欧德渊;鲜思美;尹传宝;黄璐;禾彩红;;贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建[J];中国畜牧兽医;2011年07期
5 杨开杰;;苏云金芽孢杆菌晶体蛋白分离纯化新方法研究[J];河北工业科技;2011年04期
6 刘坤;郭威;胡雪芹;张洪斌;;响应曲面法优化苏云金芽孢杆菌B28培养基[J];安徽农业科学;2011年16期
7 何传雨;丁国婵;王静梅;剡根强;;不同牛源多杀性巴氏杆菌HasR基因的克隆及序列分析[J];中国畜牧兽医;2011年08期
8 张劲松;刘国道;郭振飞;;柱花草编码CP12蛋白的cDNA克隆及其序列分析[J];热带作物学报;2011年06期
9 秦平伟;段明革;孙文婷;李名扬;徐晶;;蜡梅金属硫蛋白基因的克隆与原核表达[J];北京林业大学学报;2010年S2期
10 满初日嘎;谢少林;杜丽;成鹰;张冬琳;王凤阳;;海南坡鹿MYD88 cDNA的克隆及其生物信息学分析[J];吉林农业大学学报;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈由强;何炜;叶冰莹;陈如凯;;甘蔗F2KP基因的克隆及序列分析[A];中国植物生理学会第十次会员代表大会暨全国学术年会论文摘要汇编[C];2009年
2 黄欣梅;宋小凯;徐立新;严若峰;李祥瑞;;柔嫩艾美耳球虫江苏分离株5401基因的克隆、序列分析及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
3 张丽艳;刘光远;田占成;谢俊仁;龚真莉;刘建刚;;长角血蜱隐性抗原基因HI05的克隆和原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十次学术研讨会论文集[C];2009年
4 贺艳芬;汪亮亮;颉孝贤;李加琪;;荚膜红细菌SQR基因的克隆及重组质粒的构建[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
5 徐广贤;张艳;李娟;贾浩;王玉炯;;牛肺泡巨噬细胞微小RNA的克隆与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
6 谢金文;沈志强;王金良;任艳玲;管宇;苗立中;;猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
7 刘春生;王新娟;徐耀辉;杨霞;陈陆;王川庆;;猪链球菌ZKHY株谷氨酸脱氢酶基因的克隆与序列分析[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
8 王家福;朱春林;陈桂信;潘东明;;龙眼梅PGIP cDNA的克隆及序列分析[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年
9 杜爱芳;庞林海;周前进;侯玉慧;高翔;;秀丽隐杆线虫肌动蛋白启动子Act-1的克隆和分析[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
10 黄欣梅;徐立新;严若峰;李祥瑞;;柔嫩艾美耳球虫5401基因的克隆、序列分析及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第九次学术研讨会论文摘要集[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;空调竞争:莫克隆彩电[N];厂长经理日报;2001年
2 ;克隆联想PC[N];中国经营报;2002年
3 本报记者 赵伟;奇瑞:克隆年代的另类[N];中国质量报;2001年
4 鲁钟鸣;要创新不要克隆[N];新华每日电讯;2001年
5 湖南省植物保护研究所研究员张松柏 刘勇;何谓生物农药[N];湖南科技报;2010年
6 本报记者 侯朝晖;“克隆”人体 赚![N];厂长经理日报;2001年
7 本报记者 马莹;在中国克隆国际名牌展览[N];中国贸易报;2001年
8 经济学家温铁军○本报记者杨晓平;无法克隆的现代化[N];中华工商时报;2002年
9 本报记者 姚福泰;中国会克隆国际“6+3”的格局吗[N];中国汽车报;2002年
10 记者 姚备;复星重整克隆公司股权[N];中国证券报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张焱如;马生长激素(GH)基因序列、分子进化及其多态性的研究[D];内蒙古农业大学;2005年
2 李敏;牛免疫球蛋白重链基因中JH,Eμ片段敲除的研究和JH,Cμ基因的分析[D];中国农业大学;2005年
3 张运雄;欧文氏杆菌CXJZ95-198非纤维素降解特性及manA基因的克隆研究[D];中国农业科学院;2006年
4 黄晋玲;晋A棉花线粒体基因组BAC文库的构建及重要功能基因的筛选[D];中国农业科学院;2006年
5 黄俊琼;IL-31在皮肤炎症中的作用及作用机制研究[D];苏州大学;2007年
6 任鄄胜;水稻抗病基因同源序列分析及抗稻瘟病候选基因克隆[D];四川农业大学;2008年
7 黄志立;纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌与毕赤酵母中的表达[D];华南理工大学;2001年
8 王严;曲霉植酸酶基因的克隆及其表达研究[D];大连理工大学;2007年
9 喻麟;猪生长激素基因cDNA克隆与表达效应研究[D];四川大学;2007年
10 樊东;几种鳞翅目昆虫几丁质酶基因的克隆与表达研究[D];东北农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张怀江;苏云金芽孢杆菌cry2Ac基因的克隆及其特性的研究[D];河北农业大学;2005年
2 李陇梅;苏云金芽孢杆菌cry2Ad2基因的克隆与表达[D];西北农林科技大学;2006年
3 伍金元;苏云金芽孢杆菌cry1Ab22基因的克隆与原核表达[D];西北农林科技大学;2008年
4 陈宇熹;高效杀蚊苏云金芽孢杆菌BRC-LLP29的发酵优化[D];福建农林大学;2010年
5 谢宇飞;苏云金芽孢杆菌010菌株chi36基因克隆、表达和活性测定[D];福建农林大学;2010年
6 魏蒂;PCR法鉴定苏云金芽孢杆菌菌株的杀虫晶体蛋白基因[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
7 伍赠玲;苏云金芽孢杆菌WB50菌株vip3A基因和几丁质酶基因的定位[D];福建农林大学;2004年
8 郑大胜;苏云金芽孢杆菌对甜菜夜蛾毒性的筛选及DL-5789菌株的研究[D];中国科学院武汉病毒研究所;2001年
9 牛桂兰;高毒效杀甜菜夜蛾苏云金芽孢杆菌WY-190和WY-197菌株的研究[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2002年
10 王荣伟;苏云金芽孢杆菌NU-1、NU-2毒力提高与保护的研究[D];西北大学;2004年
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