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《科学通报》 2004年10期
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丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立

姚相杰  郭佳  郑从义  方呈祥  屈三甫  陈震球  李中红  李信墙  李卫云  
【摘要】:以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料,通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体,建立了一种新的HCV体外细胞培养系统.采用RT-PCR,荧光定量RT-PCR,链特异性RT-PCR,免疫印迹,免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率,结果显示,该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达,并组装成直径约47nm的HCV病毒体,病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记;该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL,远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数,也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度.检测结果证明,转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7,并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体,病毒滴度达106基因拷贝/mL.

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前4条
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2 史文芳;冯悦;魏大巧;夏雪山;;丙型肝炎病毒靶向药物及抗病毒药物筛选[J];中国生物工程杂志;2011年11期
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4 刘玲玲;蒋孝华;;丙型肝炎病毒体外细胞转染模型的研究进展[J];医学综述;2010年19期
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1 史华新;加味补肝散含药血清对肝细胞损伤线粒体能量代谢的影响[D];湖北中医药大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前4条
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【共引文献】
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10 段淑敏,赵新生,温瑞福,李德新,洪涛,毕胜利,王健伟,于建石,胡孔新,黄晶晶,张素香,徐红,许文波,郭元吉,戴淑玲,董小平,阮力;严重急性呼吸综合征(SARS)患者不同组织中冠状病毒的分离和鉴定[J];病毒学报;2003年03期
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7 辛忠涛;应用细菌表面展示技术快速筛选抗原表位及研制应急疫苗[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
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9 朱利;鲍鱼养殖水系中霍乱弧菌基因水平转移的初步研究[D];第一军医大学;2004年
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4 张玉培;丹参注射液对输卵管性不孕介入再通术后的疗效及作用机制探讨[D];广州中医药大学;2011年
5 王槐;藏药提取物体外抗呼吸道病毒作用实验研究[D];兰州大学;2011年
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8 陈奇英;干扰素诱导的DAI蛋白抑制乙型肝炎病毒复制的初步研究[D];复旦大学;2009年
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10 刘莹;重组葡萄球菌肠毒素SEA和SEO单克隆抗体的研制[D];天津大学;2010年
【同被引文献】
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4 王洪武;倪青;林兰;;中药含药血清的研究进展及其在中医学中的应用[J];北京中医药;2008年09期
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6 靳琦,胡定邦,王永炎;论中药现代研究的基本思路[J];中国医药学报;2000年02期
7 史洪涛;李陶;陈东风;胡辂;王军;;线粒体-细胞色素C途径在非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞凋亡中的作用[J];重庆医学;2007年08期
8 夏学春,陈健,张耀洲;人乙肝病毒前表面抗原PreS1在家蚕培养细胞中的表达[J];蚕业科学;2005年01期
9 高芸;冯彬;雷世鑫;姚彦红;张伟;王志江;;大蒜提取物抑菌的体外实验及临床应用研究[J];长春中医药大学学报;2010年01期
10 夏彦玲;李婷婷;李楠楠;马志朋;杨仕隆;李和平;;鹿茸粉对小鼠酒精急性肝损伤的保护作用[J];东北农业大学学报;2010年01期
【二级引证文献】
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1 舒文;马强;董慧敏;林冠峰;吴英松;;痘苗病毒辅助的重组丙型肝炎病毒生产体系中生产细胞的选择[J];世界华人消化杂志;2009年28期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
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【相似文献】
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2 季阳!610081,任勤惠!610081,朱志议!610081,史宣玲!610081,彭登厚,瞿德敏!610081,倪声全;对丙型肝炎病毒感染的10名献血者的追踪研究[J];中国输血杂志;1999年03期
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5 姚相杰;杆状病毒介导的丙肝病毒可感染体外细胞培养体系的建立[D];中国科学院研究生院(武汉病毒研究所);2007年
6 高瑞;烟草脉带花叶病毒侵染性克隆的构建及其在交叉保护、外源蛋白表达及VIGS中的应用[D];山东农业大学;2012年
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5 宁俊红;丙型肝炎病毒内部核糖体进入位点的三级结构研究[D];复旦大学;2008年
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