蛋白质沉淀剂对棉铃虫谷胱甘肽S_转移酶的部分纯化

汤方张常忠梁沛史雪岩高希武

【摘要】：通过用聚乙烯亚胺 (PEI)、硫酸铵、聚乙二醇 (PEG) 沉淀技术和 GSH_Sepharose 4B 亲和柱对棉铃虫 Helicoverpaarmigera (Hübner) 幼虫中谷胱甘肽S_转移酶进行了部分纯化研究。结果表明PEG10000 和PEG20000 的纯化效果优于硫酸铵的沉淀效果。通过PEI沉淀去核酸后, 再用硫酸铵沉淀, 中肠和脂肪体GST活性分布在70%~75%和60%~65%沉淀段,比活力分别为1081. 49和596.41 nmol (min·mg), 纯化倍数分别为2 53和2 2。在6种PEG中, PEG10000和PEG20000的纯化效果较好。在中肠和脂肪体中PEG10000沉淀的GST活性峰分别在40%~45%和30%~40%, GST比活力分别为795.11和1.080 18 nmol (min·mg), 纯化倍数分别是2 4和3 97。PEG20000沉淀中肠和脂肪体GST的活性峰分别在25%~40%和25%~45%, 比活力分别是767.57和945.96 nmol (min·mg), 纯化倍数分别是2.81和3. 05。用GSH_Sepharose 4B纯化中肠GST,GST比活力达到5.888 44 nmol (min·mg), 纯化倍数达到107.38。

【作者单位】：中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系中国农业大学农学及生物技术学院昆虫学系
【关键词】： 棉铃虫 谷胱甘肽S_转移酶 硫酸铵沉淀 聚乙烯亚胺沉淀 聚乙二醇沉淀 GSH_SepharoseB亲和柱
【基金】：国家重点基础研究发展规划“973”项目 (G2000016207) 国家自然科学基金项目 (30471153; 30170621)
【分类号】：Q965.9
【正文快照】：

　　自然界中的各种生物, 为避免受到内源性或外源性化学物质, 尤其是有毒物质的损害, 在进化过程中形成了一系列的代谢解毒酶系统 (庞战军等,1997 )。谷胱甘肽 S_转移酶 ( glutathione S_transferases, GST) 是其中最重要的酶系统之一。GST能使有害的亲电物质与内源性的

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前5条

1	赵海珍;张志祥;廖美德;张竞立;徐汉虹;;杀菌剂丙环唑对斜纹夜蛾的毒性[J];昆虫学报;2006年02期
2	张瑞峰;任永霞;徐汉虹;张志祥;;杀菌剂对斜纹夜蛾SL细胞系和幼虫的生物活性[J];昆虫学报;2007年07期
3	汤方;高希武;;昆虫谷胱甘肽S-转移酶蛋白纯化技术研究[J];昆虫知识;2007年06期
4	宣涛;吴海花;郭亚平;田怀东;马恩波;;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶分离纯化[J];昆虫知识;2009年03期
5	汤方;王燕燕;高希武;梁沛;史雪岩;;蛋白质沉淀剂对杨小舟蛾谷胱甘肽S-转移酶的部分纯化[J];林业科技开发;2010年02期

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前1条

1	豆威;书虱谷胱甘肽S-转移酶的纯化及生化毒理学特性研究[D];西南大学;2009年

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前2条

1	王贻莲;甜菜夜蛾对虫酰肼类杀虫剂抗性发展的初步监测研究[D];华中农业大学;2005年
2	宣涛;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶基因克隆、基因表达及蛋白纯化[D];山西大学;2009年

	【参考文献】
	【参考文献】

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前1条

1	庞战军,陈瑗,周玫;谷胱甘肽硫转移酶基因表达的调控[J];生物化学与生物物理进展;1997年05期

	【共引文献】
	【共引文献】

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前10条

1	孟琳琳;王进忠;张志勇;孙淑玲;张民照;张鹏飞;丁宝力;蒲媛媛;;蛇床子素对小菜蛾幼虫的胃毒作用及对虫体内两种酶活性的影响[J];北京农学院学报;2010年03期
2	黄艳君;浦冠勤;;昆虫对农药抗性的研究进展[J];长江蔬菜;2011年06期
3	赵华强;王东;李兵;许雅香;贡成良;沈卫德;;杀虫剂溴氰菊酯对野桑蚕和家蚕的毒力比较[J];蚕业科学;2008年01期
4	赵华强;王东;李兵;许雅香;沈卫德;;家蚕细胞色素P450基因CYP9A22的克隆及在中肠和脂肪体的诱导转录[J];蚕业科学;2008年04期
5	王燕红;王东;李兵;赵华强;许雅香;沈卫德;;野桑蚕细胞色素P450家族CYP4M5基因的克隆和诱导表达[J];蚕业科学;2009年01期
6	谢宇斌;;古籍保护中的虫害防治及建议[J];大学图书情报学刊;2009年04期
7	邢剑飞;刘艳;颜冬云;;昆虫对拟除虫菊酯农药的抗性研究进展[J];环境科学与技术;2010年10期
8	刘晓漫;方勇;贤振华;;农业害虫抗药性监测技术研究进展[J];广西农业科学;2010年09期
9	庄华梅;荆玉谱;张林杰;汪宽福;李晓辉;陈建丽;吴刚;;高温对小菜蛾caspase-9酶活性和基因组DNA的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2011年03期
10	阮成龙;米智;朱勇;;昆虫抗药性机制研究进展[J];蚕业科学;2012年02期

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前4条

1	董明;袁玉兰;郭新民;杨超;乔传令;;甲基对硫磷降解菌DM-1的筛选、鉴定及降解性能研究[A];农药与环境安全国际会议论文集[C];2005年
2	刘永华;蒋红波;杨丽红;豆威;王进军;;柑橘全爪螨细胞色素CYP4家族基因的克隆及序列分析[A];粮食安全与植保科技创新[C];2009年
3	石绪根;王开运;;烟碱型乙酰胆碱受体及其相关杀虫剂[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
4	任龙;芮昌辉;谭晓伟;徐希宝;;甲氧虫酰肼的杀虫分子机理及抗药性研究进展[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年

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前10条

1	王强;阿维菌素等杀虫剂混配对棉铃虫等害虫增效作用及其生理生化机制研究[D];浙江大学;2005年
2	刘建文;外源质粒DNA经胃肠道吸收对小鼠基因表达谱影响的初探[D];江南大学;2005年
3	黄剑;小菜蛾抗阿维菌素品系细胞色素P450的研究[D];西北农林科技大学;2005年
4	黄诚华;二化螟、大螟对氟虫腈和三唑磷的敏感性差异及其机理[D];浙江大学;2006年
5	尚金燕;家蚕两种类型乙酰胆碱酯酶基因的分析[D];浙江大学;2006年
6	程伟霞;嗜卷书虱和嗜虫书虱的比较毒理学研究[D];西南大学;2006年
7	杨家大;应用实时荧光定量方法研究实验用小型猪细胞色素P450的表达[D];四川农业大学;2007年
8	黄衍章;石菖蒲根茎提取物有效杀虫成分分析[D];华中农业大学;2007年
9	丁中;不同种群甘薯茎线虫对乙酰胆碱酯酶抑制剂的敏感性差异及机理[D];湖南农业大学;2007年
10	张永强;黄花蒿杀螨物质活性追踪及杀螨作用机理研究[D];西南大学;2008年

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前10条

1	姚锋娜;小菜蛾抗药性监测、对丁醚脲抗性选育及抗性机理的研究[D];华中农业大学;2010年
2	吴若旻;多杀菌素对几种储粮害虫的作用效果研究[D];河南工业大学;2010年
3	刘永榜;含缩氨基脲结构的二苯甲酮腙衍生物的合成与生物活性[D];浙江工业大学;2010年
4	郑英;药物对小鼠肝微粒体谷胱甘肽S-转移酶的激活机制研究[D];浙江大学;2002年
5	夏薇;千金藤素逆转MCF-7/ADR细胞的多药耐药性及其与GST-π和DNA TopoⅡ的关系[D];郑州大学;2003年
6	张玲;苯暴露诱导体外培养大鼠骨髓细胞凋亡及基因差异表达的研究[D];武汉大学;2004年
7	温俊平;2型糖尿病大鼠骨骼肌基因表达谱[D];福建医科大学;2004年
8	黄琳瑞;甜菜夜蛾对虫酰肼抗药性选育和抗药性机理初探[D];中国农业大学;2005年
9	帅霞;桃蚜Myzus persicae（Sulzer）对两种杀虫剂的抗药性选育及其机理研究[D];西南农业大学;2005年
10	陈利珍;棉铃虫Helicoverpa armigera （H(?)bner）蛾蛹黑型突变体生物学及生化特性研究[D];华中农业大学;2005年

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	【同被引文献】

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前10条

1	张国洲;害虫抗药性及其治理[J];安徽农业科学;2002年04期
2	马素永,周先碗,张庭芳;玉米螟谷胱甘肽转硫酶的纯化及性质研究[J];北京大学学报(自然科学版);1999年04期
3	陈霞,章玉苹;几种生物农药对甜菜夜蛾的防效试验[J];长江蔬菜;2003年01期
4	孔国顺,朱元良,刘天龙;九种药剂防治甜菜夜蛾等夜蛾类害虫试验[J];长江蔬菜;2003年10期
5	李季生;夏爱华;高绘菊;胡传英;牟志美;;蝇蛆寄生对家蚕血细胞和酚氧化酶活性的影响[J];蚕业科学;2006年02期
6	侯成香;桂仲争;;家蚕谷胱甘肽硫-转移酶的组织分布及发育期变化规律[J];蚕业科学;2007年03期
7	王梓英;王进军;Lienhard Charles;;中国虱啮属昆虫两新种记述(啮目,虱啮科)(英文)[J];动物分类学报;2006年03期
8	张民照,康乐;飞蝗总DNA的抽提及其RAPD分析条件的摸索[J];动物学研究;2001年01期
9	景晓红,康乐;光照与飞蝗卵耐寒性的关系[J];动物学研究;2003年03期
10	程伟霞,王进军,赵志模,丁伟,王梓英;四种杀虫剂对两种书虱羧酸酯酶和乙酰胆碱酯酶的抑制作用[J];动物学研究;2004年04期

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前1条

1	王光锋;多杀菌素对甜菜夜蛾的毒力及生理生化的影响[D];湖南农业大学;2003年

	【二级引证文献】
	【二级引证文献】

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前10条

1	鄢杰明;廖月枝;严善春;曹传旺;冯春富;;甲氧虫酰肼对舞毒蛾解毒酶和保护酶活性的影响[J];东北林业大学学报;2010年11期
2	张瑞峰;任永霞;徐汉虹;张志祥;;杀菌剂对斜纹夜蛾SL细胞系和幼虫的生物活性[J];昆虫学报;2007年07期
3	张志祥;任永霞;刘娜;程东美;徐汉虹;;腈菌唑导致的细胞膜穿孔对斜纹夜蛾SL细胞膜通透性的影响[J];昆虫学报;2009年02期
4	李有志;杨海君;徐汉虹;刘仲华;高必达;张瑞峰;周志成;;12a-羟基鱼藤酮对斜纹夜蛾生殖力的影响及其作用机理[J];昆虫学报;2009年03期
5	黄星艳;李文欧;张志祥;徐汉虹;;印楝素A与印楝素B对粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1-4的细胞毒性[J];昆虫学报;2010年06期
6	宣涛;吴海花;郭亚平;田怀东;马恩波;;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶分离纯化[J];昆虫知识;2009年03期
7	刘婷;秦国华;张建珍;马恩波;;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶RNA干扰效率研究[J];应用昆虫学报;2011年04期
8	郭艳琼;吴海花;宣涛;张建珍;郭亚平;马恩波;;中华稻蝗谷胱甘肽S-转移酶的分离纯化[J];应用昆虫学报;2011年04期
9	余清军;王静;朱九生;乔雄梧;;亚致死剂量阿维菌素对家蚕血细胞的影响[J];生态毒理学报;2010年05期
10	马恩波;葛娉婷;张建琴;张建珍;;飞蝗两种群羧酸酯酶及谷胱甘肽S-转移酶活性与马拉硫磷敏感性关系的研究[J];山西大学学报(自然科学版);2012年02期

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前2条

1	豆威;书虱谷胱甘肽S-转移酶的纯化及生化毒理学特性研究[D];西南大学;2009年
2	章玉萍;家蚕G蛋白亚基的克隆、表达及其相互作用的研究[D];安徽农业大学;2009年

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前3条

1	周利琳;甜菜夜蛾抗虫酰肼品系选育及其抗性发展监测研究[D];华中农业大学;2006年
2	宣涛;东亚飞蝗谷胱甘肽S-转移酶基因克隆、基因表达及蛋白纯化[D];山西大学;2009年
3	张建琴;东亚飞蝗有机磷抗性相关羧酸酯酶基因的特性及功能研究[D];山西大学;2010年

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1	;本期重点推介[J];昆虫学报;2011年07期
2	王雯;张园;王秀娟;耿阳;朱琳;;吐纳麝香与镉联合暴露对赤子爱胜蚓体内谷胱甘肽与金属硫蛋白的影响[J];生态毒理学报;2011年04期
3	邹朗云;曹广春;张谦;张彦;梁革梅;吴孔明;郭予元;;棉铃虫中肠cDNA文库的构建及EST分析[J];昆虫学报;2011年07期
4	朱剑;李保平;孟玲;;气候变暖对我国棉铃虫适生分布区的模拟预测[J];生态学杂志;2011年07期
5	张雷;张学涛;马纪;李芬;刘小宁;;棉铃虫中肠P450 CYP6B6基因5′上游序列的克隆及序列分析[J];生物技术通报;2011年07期
6	贾炎;涂书新;唐世荣;;植酸和几种抗氧化物质对自由基清除能力的比较[J];华中农业大学学报;2011年05期
7	刘永强;张贵森;周超;王伟;胡延萍;慕卫;;阳离子助剂1227和C_(8-10)及有机硅助剂Breakthru S240对三种杀虫剂的增效作用[J];昆虫学报;2011年08期
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9	曹佳;丁丽华;范忠义;程龙;蒋凯;徐晓洁;韩永健;徐承水;叶棋浓;;核心组蛋白的融合表达和纯化[J];生物技术通讯;2011年04期
10	黄凯丰;江解增;;复合胁迫下茭白体内镉、铅的亚细胞分布和植物络合素的合成[J];植物科学学报;2011年04期

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1	曹鹏;蔡雪婷;;Ⅱ期代谢酶谷胱甘肽S-转移酶研究进展[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集（第一册）[C];2011年
2	陈齐信;;生物农药Bt防治棉铃虫效果的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
3	刘定忠;王荣龙;余昌喜;;赣北棉铃虫抗药性及其治理对策的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
4	李权生;朱世华;范爱华;罗国平;;望江县棉花棉铃虫发生特点、爆发因子及防治对策[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
5	梁光浙;郑大宽;;江西棉铃虫世代划分的研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
6	董利霞;芮昌辉;谭晓伟;;棉铃虫对甲氨基阿维菌素苯甲酸盐的抗药性风险及交互抗性研究[A];公共植保与绿色防控[C];2010年
7	;棉铃虫防治工作总结[A];植病、昆虫学会通讯3[C];2002年
8	王增君;张福远;韦国庆;宋宪玉;张青;谢来泉;;棉铃虫抗药性监测及综合治理技术研究[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
9	杨秋萍;何永垠;李瑛;丁志宽;;苏北沿海棉区棉铃虫抗药性监测及治理技术初探[A];棉花重大病虫统一防治的理论与实践[C];2004年
10	王晓波;常汝镇;邱丽娟;;谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)和水孔蛋白(PIPs)基因的克隆及其表达特性的研究[A];2008中国作物学会学术年会论文摘要集[C];2008年

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1	永霖;药物性肝病“克星”———谷胱甘肽[N];大众卫生报;2005年
2	蔡德山;谷胱甘肽市场前景光明[N];中国医药报;2011年
3	特约撰稿蔡德山;国产谷胱甘肽的美好时光[N];医药经济报;2011年
4	通讯员刘骁;谷胱甘肽可增强人体免疫力[N];科技日报;2003年
5	武厥彬;棉铃虫非药剂防治方法[N];新疆科技报(汉);2005年
6	王玉堂;棉铃虫防治小招数[N];农资导报;2009年
7	翟洪民相启夺;如何防治第三、四代棉铃虫[N];农民日报;2005年
8	程利洪;防治棉铃虫不容忽视(上)[N];河南科技报;2009年
9	程利洪;杀死棉铃虫四法[N];新疆科技报(汉);2009年
10	河南植保站;河南部分秋田棉铃虫发生严重[N];农资导报;2009年

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1	陈凤菊;棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶的诱导表达及其基因克隆[D];中国农业大学;2003年
2	吕昭智;棉铃虫网络监测预警信息系统关键技术的研究[D];中国农业大学;2004年
3	乐江;CYP2E1介导异烟肼肝毒作用机制及其有效干预措施研究[D];武汉大学;2004年
4	郭鹏;N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V对细胞信号转导和基因调控的影响[D];复旦大学;2003年
5	王秋林;机体氧化还原状态的研究[D];四川大学;2005年
6	任晓霞;棉铃虫Helicoverpa armigera （Hübner）对有机磷杀虫剂靶标抗性机制的研究[D];南京农业大学;2002年
7	王玮;逆转录病毒介导的转基因技术在白血病耐药机理研究中的应用[D];苏州大学;2002年
8	梁革梅;棉铃虫Bt毒素受体蛋白生化特性、基因克隆及其与抗性的关系[D];中国农业科学院;2002年
9	郑明奇;棉铃虫细胞色素P450的诱导、纯化及其性质研究[D];中国农业大学;2003年
10	陈留记;茶儿茶素对铅处理细胞氧化损伤的抑制作用及其机理研究[D];浙江大学;2002年

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前10条

1	戚元成;导入盐地碱蓬谷胱甘肽转移酶基因对拟南芥耐盐性的影响[D];山东师范大学;2002年
2	万一;人TNF-α自体疫苗的研究[D];第四军医大学;2004年
3	徐刚;禾谷类作物谷胱甘肽转移酶与除草剂抗性相关性的研究[D];东北农业大学;2003年
4	石娜娜;白花蛇舌草乙醇提取物对人多药耐药白血病细胞K562/ADM的抗氧化作用的影响[D];浙江中医药大学;2006年
5	陈法军;蛹期土壤水分状况对棉铃虫生长发育和繁殖的影响[D];南京农业大学;2001年
6	郭庆龙;棉铃虫对4种杀虫剂的抗性现状及Bt棉对棉铃虫抗药性的影响[D];山东农业大学;2007年
7	高宇;棉铃虫Cry1A新受体蛋白的鉴定及与抗性的关系[D];东北林业大学;2010年
8	杨燕涛;降雨对棉铃虫化蛹和羽化的影响机制及对发生程度的抑制作用研究[D];南京农业大学;2000年
9	魏巍;棉铃虫几丁质酶cDNA克隆及表达研究[D];中国农业科学院;2002年
10	蔡德雷;用多项生物标志物评价家用洗涤剂对小鼠肝脏解毒系统和抗氧化系统的早期影响[D];浙江大学;2003年

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