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《中国中西医结合肾病杂志》 2005年06期
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抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究

吴镝  许国双  陈香美  师锁柱  洪权  张萍  吕扬  
【摘要】:目的:拟采用一套新的基因免疫系统制备高特异性和高效价的小鼠抗有机阴离子转运蛋白4(hOAT4 )多克隆抗体,并用该抗体对hOAT4在人肾小管上皮细胞的表达进行定位研究。方法:应用Accelrys软件分析hOAT4抗原表位,选择其中免疫源性较强的细胞内表位(E2 78~R345 ) ,从人肾组织总RNA中用反转录-聚合酶链反应(RT -PCR)方法扩增其2 0 4bp的cDNA序列,克隆到pBQAP -OVA构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi -FlT3L同时免疫小鼠,5周后取血清抗体,ELISA方法测定抗体滴度,人肾组织Westernblot和免疫组化鉴定抗体的特异性和定位表达。结果:成功构建基因免疫载体pBQAP -OVA -hOAT4 ,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA方法测得抗体滴度高达1∶30 0 0 ,该抗体识别人肾皮质膜蛋白和肾小管刷状缘蛋白6 5kD糖基化的hOAT4。人肾组织免疫组化结果提示该抗体识别定位在近段肾小管上皮细胞刷状缘的hOAT4。结论:用基因免疫方法可以成功制备高效价和高特异性抗hOAT4多克隆抗体。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 许国双;刘安;陈威;孙世仁;刘晓渭;张鹏;;有机阴离子转运蛋白3在人血管平滑肌细胞的表达[J];心脏杂志;2007年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 许国双;尿酸转运相关蛋白表达变化与慢性肾脏病患者高尿酸血症的关系及其机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
2 刘艳红;RNA干扰技术抑制Nav1.8基因表达在疼痛研究中的应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 刘彦信,赵芳萍,祖淑玉,刘士廉,刘复强,翟艳苓,杨敏,赵相印,郑德先;重组可溶型Fas的表达及抗体制备[J];中华医学杂志;2000年12期
【共引文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 刘艳红;RNA干扰技术抑制Nav1.8基因表达在疼痛研究中的应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2006年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 程何祥,周廉,王海昌,郭文怡,张荣庆,李争显;恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下血管平滑肌细胞VCAM-1分泌与表达的抑制作用[J];解放军医学杂志;2005年09期
2 邬碧波,倪兆慧,钱家麒;高尿酸血症与慢性肾衰竭心脑血管疾病的关系[J];中国中西医结合肾病杂志;2004年01期
3 唐甩恩,周文华,顾钧,张富强,刘惠芬;脊髓鞘内给药改良法—腰骶部埋管及直接注射[J];上海实验动物科学;2003年01期
4 杜恒,崔刚,张增铁,张富军,耿冬,翟连榜,刘淼;氯化镓对Walker256癌骨侵袭的抑制作用[J];西安交通大学学报(医学版);2004年04期
5 钱高潮,王红,郑佐娅,李稻,王鸿利;基因免疫法在制备凝血酶调节蛋白抗体中的应用研究[J];中华检验医学杂志;2005年04期
6 刘彦信,赵芳萍,祖淑玉,刘士廉,刘复强,翟艳苓,杨敏,赵相印,郑德先;重组可溶型Fas的表达及抗体制备[J];中华医学杂志;2000年12期
【二级引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 余立强;刘洪臣;鄂玲玲;吴霞;王东胜;;有机离子转运体mRNA在人牙龈成纤维细胞上的表达[J];中华老年口腔医学杂志;2009年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 刘志刚;泄浊除痹方治疗高尿酸血症物质基础研究[D];广州中医药大学;2011年
2 徐哲;TLR4 siRNA防治D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝损伤的实验研究[D];第四军医大学;2007年
3 余立强;人牙周膜成纤维细胞和牙龈成纤维细胞药物转运模型的建立及相关机制的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 伍丽娟;血府逐瘀汤对高尿酸血症大鼠肾小管上皮细胞OAT3和URAT1作用的研究[D];福建中医药大学;2013年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 张萍;陈香美;许国双;何娅妮;吴镝;杨聚荣;;抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究[J];第三军医大学学报;2006年23期
2 吴镝,许国双,陈香美,师锁柱,洪权,张萍,吕扬;抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年06期
3 许国双;陈香美;孙雪峰;吴镝;严泉剑;师锁柱;洪权;吕扬;;小鼠抗人Nanog多克隆抗体的制备及其鉴定[J];解放军医学杂志;2006年05期
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