菜心cDNA-AFLP分析体系的优化与建立

肖旭峰王恒黄敏雷建军

【摘要】：以菜心的顶端分生组织为试材,对影响菜心cDNA-AFLP体系的关键因子进行了探讨,以期建立适于菜心转录组差异表达的cDNA-AFLP分析体系。结果表明:Trizol法适用于菜心总RNA提取;SMART双链cDNA合成法效率较高,其中第二链cDNA合成的最佳循环数为24个;Taq I/Ase I分步各酶切3 h可使双链cDNA酶切完全;预扩增体系以模板稀释20倍,27个循环扩增效果较好,退火温度对扩增结果影响不大,但Mg2+对PCR扩增影响较大,经比较加入2.5μL Mg2+(25 mmoL/L)的预扩及选扩电泳的效果均最佳;预扩产物稀释20倍用于选择性扩增,其PAGE电泳可以获得丰富且重复性好的带型。cDNA-AFLP分析体系的优化与建立为菜心抽薹开花分子机理进一步研究奠定了基础。

【作者单位】：江西农业大学农学院;华南农业大学园艺学院;江西农业大学林学院;
【关键词】：菜心 cDNA-AFLP 分析体系
【基金】：江西省自然科学基金项目(2010GQN0032) 江西农业大学博士启动基金项目(3181)
【分类号】：S634.5
【正文快照】：

cDNA-AFLP(cDNA amplified fragment length polymorphism)技术的出现是RNA指纹技术重大突破。该技术以mRNA反转录的cDNA为研究对象,具有重复性好、灵敏度高、可靠性强等优点,对生物体转录组可进行全面、系统的分析,目前仍被用于分析转录组,寻找差异表达基因最有效的手段之一[

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