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《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 2017年03期
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表达羊口疮病毒B2L基因重组腺病毒的构建及鉴定

王勇  杨侃侃  王元红  俞赵荣  潘飞  崔佣楸  苏莉  钟灵毓  徐前明  蒋书东  李永东  
【摘要】:为构建表达羊口疮病毒(ORFV)B2L基因的重组腺病毒,提取实验室保存的ORFV AH-F10临床分离株的病毒核酸,PCR扩增B2L基因,将其克隆至穿梭载体中,再将重组穿梭质粒pHBAd-ORFV-B2L与骨架载体质粒pHBAdBHGloxΔE1利用脂质体共转染HEK293细胞,转染后48h收获包装成功的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L,对rAdORFV-B2L进行病毒滴度测定及遗传稳定性鉴定。结果表明:构建获得的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L病毒滴度达到107.9 TCID50·μL~(-1)。Western-blot检测结果表明rAd-ORFV-B2L在体外能够表达B2L蛋白,且能够与ORFV多抗血清发生特异性反应。RT-PCR检测结果表明,连续传代的rAd-ORFV-B2L能够稳定表达外源蛋白B2L。该研究为后续腺病毒疫苗的动物保护试验奠定基础。
【作者单位】安徽农业大学动物科技学院;宁波市疾病预防控制中心;
【基金】:国家自然科学基金资助项目(31602063) 安徽省自然科学基金资助项目(1508085QC60) 安徽农业大学稳定和引进人才科研项目(YJ2015-16)
【分类号】:S852.65
【正文快照】:
羊口疮又名羊传染性脓疱,是由羊口疮病毒(orf virus,ORFV)引起的一种接触性、嗜上皮性的传染病,主要感染绵羊和山羊[1]。特征性病变主要是患病动物的口唇及乳房等部位出现水泡、丘疹和脓疱[2]。虽然该病对于成年羊的发病率和致死率较低,但是羔羊的发病率较高,严重时可高达80%

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