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《江苏农业学报》 2017年01期
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Ⅰ型鸭甲型肝炎病毒VP1基因的原核表达及多克隆抗体的制备

顾玲玲  朱善元  成大荣  左伟勇  洪伟鸣  蔡树东  王安平  
【摘要】:根据已经发表的Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因序列,设计1对特异性引物(上下游分别插入Bam H I和Sac I酶切位点),利用PCR技术扩增出VP1基因,经Bam H I和Sac I双酶切后,将其克隆至原核表达载体p ET-32a上,获得重组表达质粒p ET-VP1。重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),重组蛋白经IPTG诱导成功表达。将重组蛋白切胶免疫6周龄的BALB/c小鼠,3次免疫后采血,制备DHV-Ⅰ的多克隆抗体。SDS-PAGE结果显示,成功表达出的重组蛋白分子量约为46 000。Western-blotting分析结果表明,该重组蛋白可与His组氨酸鼠单克隆抗体发生特异性反应,Western-blotting检测抗鼠DHV多抗的结果显示,DHV多抗能与目的蛋白发生特异性反应。以上结果表明,DHV的VP1蛋白在大肠杆菌中成功表达,且制备的DHV多抗能用于VP1蛋白表达的检测。
【作者单位】江苏农牧科技职业学院江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室;扬州大学兽医学院;
【关键词】Ⅰ型鸭肝炎病毒 VP基因 原核表达 多克隆抗体
【基金】:国家自然科学基金项目(31302096) 江苏省农业支撑项目(BE2013415) 江苏省六大人才高峰项目(NY-009)
【分类号】:S852.65
【正文快照】:
州225009)鸭病毒性肝炎(DVH)由鸭肝炎病毒(DHV)引起,主要侵害3周龄以下的雏鸭,是致死率高、传播快的传染性疾病,以肝出血、肿大和角弓反张为主要特征[1-2]。病原包括小RNA病毒科禽肝病毒属的鸭甲型肝炎病毒(DHAV)和星状病毒科禽星状病毒属的鸭星状病毒(DAst V)。DHV分为3个血

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