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《解放军医学杂志》 2006年05期
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小鼠抗人Nanog多克隆抗体的制备及其鉴定

许国双  陈香美  孙雪峰  吴镝  严泉剑  师锁柱  洪权  吕扬  
【摘要】:目的用基因免疫方法制备小鼠抗人Nanog多克隆抗体并进行鉴定。方法应用Accelrys软件分析Nanog抗原表位,选择其中免疫原性较强的抗原表位(A16~V101),从NanogcDNA全长质粒中扩增其cDNA(258bp)序列,克隆到pBQAP-TT构建基因免疫载体,鉴定正确后与辅助载体pCMVi-GMCSF和pCMVi-Flt3L同时免疫小鼠,12周后用ELISA方法检测血清抗体滴度,Westernblot方法鉴定抗体对人肾组织的特异性。同时将Nanog-AAV2病毒转染到HKC细胞,免疫荧光定位Nanog在细胞的表达。结果成功构建了Nanog基因免疫载体,经酶切及序列分析鉴定完全正确。ELISA结果显示抗体滴度为1∶32000。Westernblot结果显示小鼠抗Nanog多克隆抗体识别人肾组织34kD的Nanog蛋白。免疫荧光结果表明转染的Nanog基因主要表达在HKC细胞细胞核。结论用基因免疫的方法可以成功制备高效价和高特异性抗Nanog多克隆抗体。

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【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 李军;王晓敏;窦忠英;李勇;;Nanog基因的原核表达及抗体制备[J];细胞与分子免疫学杂志;2012年07期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 周建辉;肌红蛋白诱导肾小管上皮细胞损伤的机制研究及免疫吸附装置的构建[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 李军;Nanog基因的原核表达、蛋白纯化及抗体制备[D];西北农林科技大学;2007年
2 林长贵;慢病毒载体介导nanog基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞[D];福建医科大学;2008年
3 赵玉梅;蛋白酶体激活亚基3和尼克酰胺甲基转移酶基因的克隆表达、单抗制备与鉴定[D];南方医科大学;2008年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 何娅妮,陈香美,于志恒,吕杨,师锁柱,朱晗玉,彭丽霞;人钠/二羧酸协同转运蛋白1基因融合表达及其抗体制备[J];中国生物化学与分子生物学报;2002年03期
【共引文献】
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1 张剑凯;杨聚荣;李雪鹏;何娅妮;;hNaDC1基因5’侧翼区转录调控序列系列载体构建与鉴定[J];局解手术学杂志;2007年04期
2 朱晗玉,陈香美,何娅妮,洪权,孙雪蜂;人钠/二羧基转运蛋白2融合蛋白载体的构建及其原核表达[J];军医进修学院学报;2004年01期
3 何娅妮,陈香美;钠/二羧酸转运蛋白研究进展[J];生理科学进展;2003年03期
4 曹东维;;二羧酸转运蛋白对细胞端粒长度的影响[J];中国临床康复;2006年17期
5 曹东维;张苗;;二羧酸转运蛋白对人成纤维细胞周期和周期蛋白的影响[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年02期
6 袁莉,陈香美,崔世维,傅博,李志辉,冯哲,王建中;人高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白3对人成纤维细胞衰老进程的影响[J];中华老年医学杂志;2004年10期
7 何娅妮,陈香美,于志恒,吕杨,师锁柱,王兆霞,朱晗玉,彭丽霞;肾结石大鼠钠/二羧基转运蛋白1的表达及枸橼酸钾防治机制的研究[J];中华肾脏病杂志;2002年03期
8 程根阳,陈香美,洪权,冯哲,付博,白雪源,朱晗玉;人钠/二羧酸协同转运蛋白3基因调控肾小管上皮细胞线粒体膜电位的研究[J];中华肾脏病杂志;2003年06期
9 洪权,吴镝,陈香美,侯剀,冯哲,傅博,许国双,丁瑞;人尿酸转运蛋白在肾小管上皮细胞的定位表达研究[J];中华肾脏病杂志;2005年09期
10 彭丽霞,陈香美,刘航,洪权,张利,师锁柱,张雪光,白雪源,朱晗玉;肾小管基底侧钠/二羧基转运蛋白随增龄的表达变化[J];中华医学杂志;2003年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 何建英;hNaDC3对肾小管上皮细胞能量代谢和凋亡的影响以及AngⅡ的调控作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 朱晗玉;人钠/二羧酸协同转运蛋白3融合蛋白抗体的制备及其在肾脏的表达研究[D];郑州大学;2002年
2 程根阳;人钠/二羧酸转运蛋白3亚细胞定位及其调控肾小管上皮细胞线粒体膜电位的研究[D];郑州大学;2003年
3 张萍;高糖诱导肾小管上皮细胞hNaDC3表达变化及其信号传导的研究[D];第三军医大学;2006年
【同被引文献】
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1 亓玉民,尹鸿轸,陈远耀;处理杂交瘤细胞污染的有效方法[J];白求恩医科大学学报;1989年01期
2 郝文波,洪艳华,孙晓敏,宁云山,张冬梅,潘卫庆,李明;抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定[J];第一军医大学学报;2005年09期
3 主鸿鹄,李振宇;基因洽疗中慢病毒载体的最新进展[J];国外医学.输血及血液学分册;2002年05期
4 刘江,姜述德;细胞污染支原体的检测及清除[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1995年02期
5 张小霞,严卫星,徐海滨;外源蛋白质表达系统类型的研究进展[J];国外医学(卫生学分册);2004年04期
6 廖国荣;结直肠癌的早期诊断方法[J];广州医药;2002年06期
7 张德莉;黄应平;罗光富;刘德富;马万红;赵进才;;Fenton及Photo-Fenton反应研究进展[J];环境化学;2006年02期
8 刘晓光,董晓燕,周露芳;分子伴侣与蛋白质复性的简介[J];化学工业与工程;2000年02期
9 谢院生;陈香美;;加深对横纹肌溶解症的认识[J];军医进修学院学报;2008年06期
10 张利;陈香美;;挤压综合征的诊治[J];军医进修学院学报;2008年06期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 庄淑珍;siRNA干扰ES细胞nanog基因及nanog基因真核表达载体的构建[D];西北农林科技大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 刘玉华;鸡恒定链基因的克隆、表达及其抗体制备[D];安徽农业大学;2004年
2 蔡震;人新基因EOLA1的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备[D];第三军医大学;2005年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 刘伸琴;在未分化的人骨髓间充质干细胞内鉴定调节Nanog基因表达的顺式调控元件[D];汕头大学;2008年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 罗振革,孔祥英,彭虹,张明,高杰英;重组FAS分子的表达、纯化及抗体制备[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高慧,孙强,黄正芳,吴宝金,李厚达;地方株HPV16L1基因免疫小鼠诱发的抗体反应[J];中华微生物学和免疫学杂志;2005年03期
2 吴镝,许国双,陈香美,师锁柱,洪权,张萍,吕扬;抗人有机阴离子转运蛋白4多克隆抗体的制备及其在肾脏的定位研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2005年06期
3 俞顺章,周文忠;迎接第三次疫苗革命——核酸疫苗[J];中国公共卫生;1997年09期
4 钱高潮,王红,郑佐娅,李稻,王鸿利;基因免疫法在制备凝血酶调节蛋白抗体中的应用研究[J];中华检验医学杂志;2005年04期
5 鲍俊峰;王胜军;马洁;崔大伟;杨先知;毛朝明;仝佳;邵启祥;许化溪;;小鼠Foxp3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[J];江苏大学学报(医学版);2008年04期
6 许国双;刘安;;用基因免疫方法制备小鼠抗人OAT1多克隆抗体[J];医学临床研究;2007年05期
7 许国双;刘安;;用改良的基因免疫方法制备小鼠抗人OAT3多克隆抗体[J];中国现代医学杂志;2007年15期
8 张萍;陈香美;许国双;何娅妮;吴镝;杨聚荣;;抗人有机阴离子转运蛋白3抗体制备及其在肾脏定位的研究[J];第三军医大学学报;2006年23期
9 王堃;田鹤;张萍;郭敏;;整合素α_2、α_3在小鼠肾发育过程中的表达[J];解剖学杂志;2008年04期
10 邓涛,李琳,陈乃龄,贾克明;丙肝病毒基因免疫研究现状[J];临床肝胆病杂志;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杨杨;张国新;王晓勇;郝波;林艳;王宏娣;;HCCR蛋白多克隆抗体的制备及其在人胃癌中的表达研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
2 刘晓;唐波;郑伟娟;华子春;;雷公藤内酯醇人工抗原的合成及多克隆抗体的制备[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
3 张伟;冯娟;陈炜;张小娟;袁树民;廉虹;张连峰;;系统表达HB-EGF转基因小鼠的建立[A];实验动物与药理学、毒理学研究学术交流会论文汇编[C];2009年
4 方征宇;熊亮;王小川;王建枝;;背根切断对小鼠脊髓内S100A4表达的影响[A];全国血栓/止血与微循环学术会议论文汇编[C];2006年
5 林玮;杨宏亮;谭立志;郭晓奎;;钩端螺旋体预测的部分外膜蛋白基因的克隆表达及多克隆抗体的制备[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
6 刘文博;陈媛媛;李德朋;付云贺;张乃生;郭梦尧;杨正涛;;奶牛黏附分子MadCam-1基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
7 明晓波;张颖;尹鑫;魏萍;王宗尉;李若飞;;鸡氨肽酶N基因克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(下册)[C];2009年
8 杨敏;王锁英;许小朋;马洁;毛朝明;仝佳;邱谷风;胡正军;王胜军;邵启祥;许化溪;;人T-bet基因的表达、纯化及其多克隆抗体的制备[A];中国免疫学会第五届全国代表大会暨学术会议论文摘要[C];2006年
9 欧陕兴;杨太成;王江涛;;抗rhANG多克隆抗体对高危人群肺癌筛检研究[A];中华医学会第十三届全国放射学大会论文汇编(下册)[C];2006年
10 林玮;杨宏亮;谭立志;郭晓奎;;钩端螺旋体预测的部分外膜蛋白基因的克隆表达及多克隆抗体的制备[A];上海市预防医学会第二届学术年会论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报实习 生金平 本报记者 张咏晴;“乙肝小鼠”成人类替身[N];文汇报;2005年
2 奇 云;单亲小鼠可能打开潘多拉魔盒[N];大众科技报;2004年
3 记者 刘恕 刘霞;利用皮肤细胞培育出健康小鼠[N];科技日报;2009年
4 何德功;小鼠实验证明小脑严重缺乏亦能存活[N];医药经济报;2005年
5 宿健桃;药用植物多糖类成分药理作用综述[N];中国中医药报;2002年
6 周松;TRPM8是“冷”蛋白[N];中国医药报;2007年
7 甘勃;后基因组时代看小鼠继续“开天”[N];大众科技报;2008年
8 陆家训;P-53蛋白质有两面性[N];健康报;2002年
9 记者 姜澎 实习生 章佩銮;小鼠轻松“删除”痛苦记忆[N];文汇报;2005年
10 陈列欢;智力高低与基因有关?[N];医药经济报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姜勋平;抑制素和bcl-2基因免疫对小鼠繁殖和生长的影响[D];南京农业大学;2001年
2 刘琰;五羟色胺对小鼠社会行为的影响[D];北京协和医学院;2008年
3 马宁;小鼠神经行为测试组合建立及邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠学习记忆影响的研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
4 张斌;适于微米切片的小鼠全脑标本制备方法研究[D];华中科技大学;2011年
5 王芳;应激和丰富环境及1-脱氧野尻霉素对小鼠衰老相关行为改变的影响[D];安徽医科大学;2012年
6 许袖;谷胱甘肽过氧化物酶3在小鼠围着床期子宫中的表达、调节与功能[D];东北农业大学;2011年
7 薛承彪;TLR/MYD88/NF-κB信号通路阻断对减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用研究[D];华中科技大学;2012年
8 段利华;IL-33参与小鼠实验性肠炎的作用及其机制HMGB1参与小鼠同种心脏移植早期排斥的作用机制[D];华中科技大学;2012年
9 张路培;牛肌肉生成抑制素基因遗传变异及基因免疫的初步研究[D];中国农业科学院;2009年
10 赵海丹;抗多囊蛋白-1单克隆抗体和多克隆抗体的制备及其在常染色体显性遗传性多囊肾病发病机理研究中的应用[D];第二军医大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘鑫;PDIP1γ基因的克隆、表达及功能初步研究[D];湖南师范大学;2005年
2 周旋;枸杞多糖粗提物抗衰老作用及其与信号传导系统Ca~(2+)-CaM的相关性研究[D];新疆农业大学;2009年
3 王新元;原核表达小鼠嗅觉受体MOR28及其多克隆抗体的制备[D];东北师范大学;2006年
4 田娟;钙结合蛋白D28k在小鼠肾脏发生发育中的表达[D];兰州大学;2007年
5 杨明夏;抗药性相关NYD-Ch和NYD-Tr基因表达与初步鉴定[D];南京医科大学;2003年
6 黄雅丽;氯霉素酶联免疫分析方法及试剂盒研究[D];浙江大学;2005年
7 徐永春;EB病毒Rta重组蛋白多克隆抗体的制备与初步应用研究[D];四川大学;2005年
8 侯秋莲;鹅细小病毒VP2基因片段在原核系统中的表达及多克隆抗体的制备[D];新疆农业大学;2005年
9 王宇;大鼠脊髓损伤与修复相关基因:生物信息学分析及SCIRR10分子特性[D];吉林大学;2005年
10 韩艳;中国鲎抗菌肽Tachyplesin Ⅰ原核表达及其多克隆抗体的制备[D];吉林大学;2007年
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