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《湖南师范大学自然科学学报》 2017年01期
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HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

李苗苗  杨霄旭  杨朝霞  向双林  韩梅  
【摘要】:为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.

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1 史良如,卫丹,M.E.Schneider,H.Th.Bruesster,P.Wernet,R.Schauder,F.O.Gombert,G.Jung;HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位[J];免疫学杂志;1991年03期
2 ;[J];;年期
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