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《湖南师范大学自然科学学报》 2017年01期
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HIV-1型Nef基因重组表达载体的构建及其稳定表达细胞系的建立

李苗苗  杨霄旭  杨朝霞  向双林  韩梅  
【摘要】:为了构建艾滋病毒HIV-1型Nef基因重组表达载体,利用PCR从p NL4-3质粒上扩增HIV-1型Nef基因,获得Nef基因完整的编码区,构建可表达Nef蛋白的p EB-myc-nef重组表达载体.经鉴定正确后,利用LipofectamineTM2000将重组质粒转染SW480细胞,通过Western Blot技术检测Nef蛋白的瞬时表达.为了建立稳定表达Nef基因的SW480细胞系,采用G418筛选建立稳定表达细胞系的方法,筛选出单克隆细胞系.扩大培养克隆细胞后,通过RT-PCR和Western Blot分别检测Nef的mRNA转录水平及蛋白表达水平,经长达60 d的传代,最终获得稳定表达Nef基因的SW480细胞系,为研究RNAi在艾滋病治疗方面的应用提供了细胞模型.
【作者单位】湖南师范大学生命科学学院;
【关键词】Nef基因 SW细胞 G 稳定细胞系
【基金】:湖南省科技厅重点项目(2014FJ2006) 长沙市科技局重点项目(K1205221-31)
【分类号】:R512.91;Q78
【正文快照】:
艾滋病(AIDS)全称为“获得性免疫缺陷综合征”,是一种由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的,以全身免疫*通讯作者,E-mail:hanmei@hunnu.edu.cn系统严重损害为特征的传染性疾病.RNA干扰(RNAi)是细胞内序列特异性抑制靶基因表达的机制,具有高效性、特异性和副作用小的特点,将其应用于抗H

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1 史良如,卫丹,M.E.Schneider,H.Th.Bruesster,P.Wernet,R.Schauder,F.O.Gombert,G.Jung;HIV-1及其nef蛋白存在有与正常人组织呈交叉反应的表位[J];免疫学杂志;1991年03期
2 ;[J];;年期
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