扇脉杓兰AFLP反应体系的建立
【摘要】：通过SDS法、高盐低pH法、常规CTAB法、高盐CTAB法和改良CTAB法提取扇脉杓兰(Cypripedium japonicum Thunb.)幼叶基因组DNA,并对其AFLP反应体系进行了优化。结果表明:改良CTAB法所提取的DNA电泳条带清晰无污染,A260和A280比值在1.8～2.0,用限制性内切酶酶切后条带均一,酶切时间以4 h为宜。最终确定50μL PCR反应体系的最佳条件为:预扩增产物稀释20倍4μL,dNTP(2.5 mmol/L)3μL,Mg2(+25 mmol/L)4μL,MseⅠ(10μmol/L)和EcoRⅠ(10μmol/L)各1.5μL,Taq DNA聚合酶(5 U/μL)0.3μL。
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