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《黑龙江畜牧兽医》 2009年09期
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瘤胃总甲烷菌实时荧光定量PCR方法的构建

李长青  金海  栗原光规  
【摘要】:试验构建了瘤胃总甲烷菌实时荧光绝对定量PCR的标准品及标准曲线用于总甲烷菌的定量测定,并提取瘤胃微生物总DNA,以甲烷菌特异性引物进行PCR扩增,回收纯化PCR产物,与pBS-T载体连接并转化到大肠杆菌,再用氨苄西林培养基筛选阳性重组质粒,提取含目的片段质粒DNA,通过PCR及测序鉴定重组质粒。根据OD值确定浓度,将梯度稀释的质粒作为模板,进行荧光定量PCR反应并作出标准曲线。结果表明:所构建的标准曲线具有很高的相关性(R2=0.992),并获得了高扩增效率产物。

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