收藏本站
《环境科学》 2012年11期
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于RT-qPCR选择性检测水中活性病原菌

林怡雯  李丹  吴舒旭  何苗  杨天  
【摘要】:以大肠杆菌和粪肠球菌作为研究对象,研究建立了一种逆转录定量PCR(reverse transcription q quantitative PCR,RT-qPCR)方法,以选择性检测水中活性病原菌.研究结果表明,细菌体内的RNA经过RT-PCR逆转录成cDNA后利用qPCR可定量目的基因拷贝数,对处于稳定生长期的大肠杆菌(培养6~18 h)和粪肠球菌(培养10~38 h)体内的RNA含量进行检测分别为1 copies.CFU-1和7.98×102copies.CFU-1,以此作为细菌定量的依据,达到准确定量检测水体中目的基因RNA拷贝数而确定活性细菌含量的目的.通过3种方法(培养法、qPCR、RT-qPCR)检测热灭活后的大肠杆菌和粪肠球菌,结果表明与qPCR相比,RT-qPCR能够区分1.43 lg copy(大肠杆菌)与2.5 lg copy(粪肠球菌)的非活性菌,进而选择性检测活性病原菌.实际水样底物基质对RT-qPCR方法的影响不大,RT-qPCR与培养法之间有较好的线性相关性(大肠杆菌,R2=0.930,粪肠球菌,R2=0.948),本研究建立的方法可以用于实际水样活性病原菌的检测.

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 胡秀华;何苗;刘丽;李丹;施汉昌;;水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建[J];环境科学;2008年02期
2 仝铁铮;吴舒旭;李丹;何苗;杨天;施汉昌;;基于PMA-定量PCR选择性检测技术的病原菌消毒特性研究[J];环境科学;2011年04期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 April Z.Gu;;Evaluation of the infectivity,gene and antigenicity persistence of rotaviruses by free chlorine disinfection[J];Journal of Environmental Sciences;2011年10期
2 杨万;何苗;李丹;施汉昌;刘丽;;免疫磁珠分离与实时定量PCR技术联合检测水中轮状病毒的研究[J];环境科学;2009年05期
3 仝铁铮;吴舒旭;李丹;何苗;杨天;施汉昌;;基于PMA-定量PCR选择性检测技术的病原菌消毒特性研究[J];环境科学;2011年04期
4 徐楠楠;胡桂学;;实时荧光定量PCR技术的研究进展及应用[J];黑龙江畜牧兽医;2011年21期
5 刘小荣;张笠;王勇平;;实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年02期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 叶晓艳;饮用水中病毒浓缩及检测方法的研究和应用[D];华中科技大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 张超;山羊激活素A型受体基因cDNA的克隆及定量表达研究[D];西南大学;2011年
2 仝铁铮;PMA-qPCR选择性检测水中活性菌方法的研究与应用[D];清华大学;2010年
3 张德友;北京地区水环境中轮状病毒的分布规律及其健康风险评价[D];北京林业大学;2009年
4 李长雷;核移植山羊鉴定和H19基因调控表达分析[D];西北农林科技大学;2010年
5 陈小金;PEDV、TGEV、PoRV SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR诊断方法的探索[D];中国农业科学院;2010年
6 叶晓艳;实时荧光定量PCR检测肠道病毒方法的建立[D];华中科技大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 王云,鲁巍,张晓健;氯及氯胺灭活大肠杆菌的消毒动力学模型[J];环境科学;2005年05期
2 胡秀华;何苗;刘丽;李丹;施汉昌;;水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建[J];环境科学;2008年02期
3 常汝虚,何翠娟,朱冰,张又,钱渊;腹泻患儿粪便标本中轮状病毒检测方法的比较[J];中华儿科杂志;2000年11期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王娜;何苗;施汉昌;;水环境中大肠杆菌多特征抗原及抗体的制备研究[J];环境科学;2007年05期
2 陈艺;;水环境中大肠菌群检测方法的对比研究[J];环境保护与循环经济;2008年02期
3 张征;;饮用水臭氧消毒效果的影响因素[J];环境与健康杂志;2008年05期
4 高德;阮晶晶;洪剑明;;湿地植物的抑菌效应研究[J];河北师范大学学报(自然科学版);2009年04期
5 李东力;易彬樘;陈春田;王昊;;模拟高氧化还原电位溶液杀菌效果观察[J];解放军预防医学杂志;2009年05期
6 宋宏娇;汪恂;;掺铈纳米TiO_2薄膜的光催化灭菌性能研究[J];工业用水与废水;2010年05期
7 李淑英;苏亚丽;周元清;史云东;别金蓉;;重金属胁迫培养对2种细菌生长曲线的影响[J];安徽农业科学;2011年01期
8 王纯冰;孔庆财;徐伟;朱玉燕;孙文娟;林亚玲;袁勇军;;脉冲强光对流动水中大肠杆菌的杀灭效果研究[J];食品科技;2011年04期
9 刘南;熊鸿燕;李秀安;;二氧化氯对水消毒效果及消毒副产物的测定[J];中国消毒学杂志;2007年03期
10 张悦;李国锋;李杰;;高压脉冲电场水中杀菌[J];河北大学学报(自然科学版);2007年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴彦;王翠华;李国锋;;利用双向脉冲放电产生的等离子体灭活大肠杆菌[A];中国物理学会静电专业委员会第十二届学术年会论文集[C];2005年
2 张晓冬;武君;李志义;刘东学;;水力空化能量的杀菌作用及其效果[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2006年
3 王纯洁;敖日格乐;;牛粪尿处理及环境大肠杆菌的抑制研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
4 常青云;贺泓;曲久辉;赵进才;;Ce-Ag/AlPO_4催化灭活大肠杆菌性能研究[A];第五届全国环境催化与环境材料学术会议论文集[C];2007年
5 刘南;李秀安;朱兵;银涛;;水消毒效果检测方法的探讨[A];重庆市预防医学会2009年论文集[C];2009年
6 马宁;廖日红;刘操;申颖洁;黄赟芳;战楠;;光催化复合微滤膜技术的地表水处理应用性能研究[A];2010年膜法市政水处理技术研讨会论文集[C];2010年
7 赵红宁;王学江;夏四清;;微生物传感器在污染物生物毒性分析中的应用[A];2007中国可持续发展论坛暨中国可持续发展学术年会论文集(2)[C];2007年
8 韩伯睿;王宝品;张继达;崔玉杰;;冀衡牌溴氯海因消毒片对游泳池水消毒效果及毒性试验研究[A];中国精细化工协会第一届水处理化学品行业年会论文集[C];2005年
9 曹兰;戴荣国;王孝友;王瑞生;赵顺华;曹联飞;周敏;;秸秆醋液对鲜鸡粪抑杀菌及臭气降解效果的研究[A];中国畜牧兽医学会家畜生态学分会第七届全国代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
10 魏文韫;李正山;;聚合硫酸铁的制备及复配使用研究[A];四川省环境科学学会2003年学术年会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本报记者 李禾实习生 梁海燕;如何让家居变得环保又节能?[N];科技日报;2007年
2 杨继春;吉木乃县退出旅游保护冰山[N];新疆日报(汉);2008年
3 健康时报记者 李梅浠;空调最脏的不是过滤网[N];健康时报;2009年
4 本报记者 孟祥华;我州小型医院污水处理有新招[N];博尔塔拉报;2008年
5 日报记者 闫友明 实习生 张威;购物篮=细菌中转站?[N];柳州日报;2008年
6 陈维刚 记者 蔡冲春;市民可以放心饮用[N];长白山日报;2005年
7 本报记者  陈晓钟;为健康把关[N];人民日报;2006年
8 本报记者 简工博本报实习生 潘金燕;超市购物用具需定期“洗澡”[N];解放日报;2008年
9 钱峰;洗浴美容美发场所卫生状况堪忧[N];健康报;2008年
10 周甲禄 沈翀 杨三军;洪湖岸边“没”水吃[N];经济参考报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 高爱保;重金属诱导长江华溪蟹RNA差异显示及定量分析[D];山西大学;2011年
2 徐芳芳;柔性金属对大肠杆菌毒性机理的研究[D];东华大学;2012年
3 王翠华;脉冲放电等离子体杀菌灭藻及其藻毒素去除的研究[D];大连理工大学;2008年
4 杨翠云;微囊藻毒素对微生物的生理生态学效应[D];中国科学院研究生院(水生生物研究所);2007年
5 张胜华;回用中水超声及其协同紫外消毒效能与机制研究[D];江苏大学;2009年
6 付晚涛;繁茂膜海绵生物修复和生物监测近海养殖水体的可行性研究[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2006年
7 马宁;多功能TiO_2光催化复合分离膜制备和水处理应用性能研究[D];大连理工大学;2009年
8 赵和平;菲降解菌分离鉴定、降解基因克隆与表达及菲跨膜作用研究[D];同济大学;2007年
9 陈建秋;睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因功能及表达调控研究[D];福建农林大学;2009年
10 夏妍;海州香薷耐铜性和金属硫蛋白基因克隆及功能分析[D];南京农业大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨小姣;谷氨酸废水提取RNA的研究[D];山东轻工业学院;2010年
2 刘亚军;水体中大肠杆菌快速检测方法和仪器的研究[D];华东师范大学;2009年
3 陈文静;家禽养殖场废弃物农用安全性的初步研究[D];扬州大学;2010年
4 高琼;大肠杆菌在土壤中的迁移特性实验研究[D];天津理工大学;2011年
5 李冬梅;近岸大肠杆菌多样性及其溯源研究[D];大连海事大学;2012年
6 王冬;多氯联苯(PCBs)的环境生态毒性研究[D];浙江大学;2006年
7 黄晶晶;纳米材料在快速检测水体中大肠杆菌的应用和研究[D];华东师范大学;2010年
8 马建权;纳米二氧化钛光净化技术在医院含菌污水处理上的应用研究[D];四川大学;2005年
9 亓建伟;纳米二氧化钛用于医院含菌废水处理的光催化反应器设计[D];四川大学;2005年
10 李志富;二氧化氯和电化学法在医院污水中灭菌性能的研究与应用[D];山东师范大学;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026