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《贵州医药》 2017年02期
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Flag-p107真核表达载体的构建及其在ECA109细胞表达及鉴定

来雯婷  崔元龙  刘伊宁  李晓苗  吉别克·瓦提别克  美丽吾尔提·达吾列提汗  沙亚哈提·别尔克哈之  王海峰  李颖  李惠武  李卉  
【摘要】:目的构建N端含flag标签的p107的真核表达载体,及其在EC109细胞表达的鉴定。方法设计引物在p107蛋白N端增加flag标签,通过PCR扩增获得3×flag-p107cDNA片段,将此片段插入真核表达质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin中;再与质粒CMV-MCS-SV40-Neomycin连接,将所得的融合基因进行PCR、酶切及DNA测序验证正确后,利用电转染将其转染至ECA109细胞中;利用Western-Blotting检测融合蛋白CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin的表达情况。结果重组真核表达载体构建正确,该重组质粒能在ECA109细胞中表达。结论成功构建真核表达载体CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin并建立了其在ECA109细胞的表达。
【作者单位】新疆医科大学基础医学院;新疆医科大学附属肿瘤医院;新疆医科大学中心实验室;
【关键词】视网膜母细胞瘤样蛋白I 真核表达载体 分子克隆 基因表达
【基金】:国家自然科学基金(项目编号:81660459)
【分类号】:Q78
【正文快照】:
p107属于pRb家族,pRb由抑癌基因Rb基因编码,与pRb有相当多的共性。视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)是调控G1/S期细胞周期转换的重要分子,与视网膜母细胞瘤样蛋白1、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)具有相似的口袋状DNA结合区域,共同属于口袋蛋白家族[1],p107通过磷酸化以细胞周期依赖性的

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