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《现代食品科技》 2017年01期
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干酪乳杆菌LCR6013中NiR和电子供体的分离纯化及其协同降解亚硝酸盐

陈浩  陈思敏  刘冬梅  黄娟  陈舒然  吴晖  黄智斌  韩欣  
【摘要】:干酪乳杆菌LCR 6013经10.00 mg/L的亚硝酸钠诱导和溶菌酶破壁,粗酶溶液分别经过30%和60%饱和硫酸铵溶液分级沉淀,沉淀被溶解和透析后分别得蛋白液Ⅰ和蛋白液Ⅱ,通过阴离子DEAE Sepharose Fast Flow和葡聚糖凝胶G-100层析柱分离纯化。蛋白液Ⅱ纯化得亚硝酸盐还原酶蛋白(NiR),在加入细胞色素C才能降解亚硝酸盐,LCR6013的每升发酵液得到0.54 mg活性酶蛋白,其NiR比酶活为1851.20 U/mg,得率为2.08%,纯化后其NiR比活力提高16倍,经SDS-PAGE电泳确定LCR6013 NiR的单体分子质量约为45 ku。同时,由蛋白液Ⅰ纯化的蛋白加入LCR6013的NiR中,表现降解亚硝酸盐的活力,经鉴定为电子供体蛋白(El D),经SDS-PAGE电泳确定LCR6013中ElD的单体分子质量约为13 ku,与细胞色素C的单体分子质量相同。LCR6013的ElD、细胞色素C、FeSO_4和Na_2SO_3分别协同NiR能在48 h内将75.00 mg/L的亚硝酸钠完全降解,而LCR6013的ElD和细胞色素C降解效果最好。
【作者单位】华南理工大学食品科学与工程学院;
【关键词】干酪乳杆菌 亚硝酸盐还原酶 分离纯化 电子供体
【基金】:国家自然科学基金资助项目(31101254) 广东省自然科学基金(S2011010005679) 中央高校业务经费专项基金(D2116760) 广东省省级科技计划项目(2014A020208019)
【分类号】:TS201.3
【正文快照】:
研究降解食品中的亚硝酸盐是食物安全的研究重点之一。食品添加剂GB 2760-2011中对添加亚硝酸盐的范围和用量有严格的规定,但是超标的亚硝酸盐残留有极大的危害,众所周知,亚硝酸盐是亚硝胺的前体物质,而亚硝胺是一种强致癌物,可以诱发消化系统中的多种癌变,如胃癌、肝癌和肠癌

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