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《现代食品科技》 2017年01期
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雅致放射毛霉羧肽酶Y的基因克隆、表达与酶学性质研究

纪海兵  刘中美  郭军玲  周哲敏  
【摘要】:本研究从雅致放射毛霉中克隆、表达和纯化羧肽酶Y(CPY),体外激活后检测其酶学性质。本文筛选并鉴定了一株腐乳发酵菌株,命名为雅致放射毛霉PEP001(Actinomucor elegans PEP001)。以相近种族来源的真菌羧肽酶Y保守序列设计简并引物调取部分目的基因序列,利用末端扩增技术(RACE)分别获得3’与5’端基因全长,克隆获得羧肽酶Y基因,全长为1557 bp,编码518 aa。将其酶原(pro CPY)在大肠杆菌Rosetta中重组表达,产物为包涵体;在毕赤酵母GS115中成功分泌表达pro CPY,产量为151.20±10.20mg/L。通过体外激活与纯化,获得电泳纯的成熟羧肽酶Y。成熟羧肽酶Y最适pH为6.0,最适温度为45℃,在40℃下有较高稳定性,在60℃下很快失活,在pH 4.0~7.0下都有较高的稳定性。本文中雅致放射毛霉PEP001羧肽酶Y为首次报道,为进一步研究其应用打下一定基础。
【作者单位】江南大学生物工程学院;
【关键词】雅致放射毛霉 羧肽酶Y 酶学性质
【基金】:国家自然科学基金资助项目(31400078) 江苏省产学研联合创新资金-前瞻性联合研究项目(BY2014023-21)
【分类号】:Q936;Q78
【正文快照】:
羧肽酶(carboxypeptidase)是一类可水解肽链C末端氨基酸残基的蛋白酶,广泛的存在于细菌,真菌,植物与动物中,主要分为丝氨酸羧肽酶、金属羧肽酶和半胱氨酸羧肽酶。羧肽酶Y(CPY,EC 3.4.16.5)是丝氨酸类蛋白酶,其活性中心由丝氨酸、天门冬氨酸和组氨酸(Ser-Asp-His)组成。CPY具有

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