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MDA-PCR检测痕量结核分枝杆菌核酸方法的建立

周林甫  万群  赵钢  张红鸭  
【摘要】:目的 建立基于多重置换扩增及PCR (MDA-PCR)技术检测痕量结核分枝杆菌(M.tb)核酸的方法。方法 制备含有M.tb插入序列IS6110和IS1081的不同稀释浓度的质粒DNA标准品。MDA-PCR分别通过检测质粒DNA标准品和其他细菌标准株基因组DNA来验证该方法的敏感度及特异性。另外,通过对模拟结核性脑膜炎(TBM)患者脑脊液(CSF)标本检测,评价该方法检测临床标本的可行性。结果 MDA-PCR方法对质粒DNA标准品IS6110、IS1081基因的最低检测下限分别为10、25拷贝,其检测敏感度是ST-PCR方法的40~100倍。另外,该方法对5种其他细菌标准株基因组DNA的检测结果均为阴性,无非特异性反应发生。MDA-PCR对模拟TBM患者CSF中M.tb IS6110及IS1081基因的最低检测下限均为1 CFU,其检测敏感度是ST-PCR的10~4~10~5倍。结论 MDA-PCR方法可提高对CSF中痕量M.tb核酸的检测效率,为TBM早期诊断提供了一种新的研究策略。

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