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《分析化学》 2011年09期
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超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

董莲华  盛灵慧  王晶  黎朋  
【摘要】:采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎(功率300 W,频率24 kHz)技术将质粒DNA破碎成200~500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸(dCMP:3.2 min;dTMP:4.7 min;dGMP:5.3 min,dAMP:6.8 min),将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比(A∶T=0.95,C∶G=0.98)与理论值接近。本方法的测定结果(47.24μg/g)与实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR,45.98μg/g)和PicoGreen荧光染料法(46.02μg/g)的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析。
【作者单位】中国计量科学研究院;
【基金】:科技支撑项目(No.2008BAK41B01) 博士科研专项基金(No.ATQDB0908)资助
【分类号】:O629.7;O657.72

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【同被引文献】
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1 王娅;王哲;徐闯;邓俊良;阳凤林;;核酸定量方法研究进展[J];动物医学进展;2006年07期
2 冯硕,李正平,张淑红,方正;共振光散射技术测定核酸的研究进展[J];光谱学与光谱分析;2004年12期
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