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Chelex-100提取生物检材DNA实时PCR定量研究

杨电  刘超  李越  陈玲  胡慧英  李红霞  陈向红  
【摘要】:目的研究Chelex-100法提取的生物检材DNA用量与复合STR分型成功率的关系。方法113份各种生物检材采用Chelex-100法提取DNA,应用Quantifiler人类DNA定量试剂盒在ABI 7500荧光定量PCR仪上进行实时PCR定量,同时用Identifiler复合扩增系统在ABI 3100遗传分析仪上对这些DNA样品进行STR分型。结果各种生物检材提取的DNA浓度分别为:37份滤纸、纱布血痕0.042~5.28ng/μl,16份口腔拭子1.15~4.21ng/μl,18份烟头0.016~1.46ng/μl,10份肋软骨0.531~14.40ng/μl,8份肌肉5.75~24.80ng/μl,7份指甲0.788~11.50ng/μl,17份精斑0.79~99.50ng/μl。在建立的8μl扩增体系中,根据上述结果,调整用于复合STR扩增的DNA模板量在0.5~3ng之间,大部分样品可获得完全的STR分型。结论Chelex-100法提取的检材DNA模板用量在0.5~3ng之间可得到有效STR扩增,浓度为0.5ng/μl以上的DNA样品,用小体积模板(1μl)比大体积(3μl)模板扩增效果好。

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