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《福建农林大学学报(自然科学版)》 2017年01期
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鲤鱼g型溶菌酶基因的cDNA克隆及其在毕赤酵母中的表达

李雯  陶妍  
【摘要】:从鲤鱼鳃组织中分离克隆到一种新的g型溶菌酶同工型基因(CLYG).该基因的全长cDNA为558 bp,除去终止密码子,编码185个氨基酸,推断的氨基酸序列没有信号肽,含3个催化位点(谷氨酸73、脯氨酸86和天冬氨酸97),具有鱼类g型溶菌酶的基本特征.通过PCR方法在CLYG基因的5'和3'端分别引入XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点.扩增到的目的片段与表达载体pPICZαA连接构建重组表达载体pPICZαA-CLYG后,电转至毕赤酵母X-33,筛选得到的阳性转化子在1.0%甲醇、29℃、pH 6.0的条件下诱导表达72 h,获得重组体CLYG.SDS-PAGE和蛋白质印迹分析显示,在毕赤酵母中成功表达了重组体CLYG.
【作者单位】上海海洋大学食品学院/上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心;
【关键词】鲤鱼 g型溶菌酶 毕赤酵母 重组表达
【基金】:上海市教育委员会产学研项目(15CXY30) 农业部都市农业(南方)重点实验室开放项目(UA201307) 上海市交叉学科研究生拔尖创新人才培养平台项目(B5201120040) 上海市2015高校内涵建设项目(A2018150009)
【分类号】:Q78;Q55
【正文快照】:
溶菌酶(EC 3.2.1.17)是一类能水解肽聚糖N-乙酰胞壁酸(NAM)与N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)之间的β-1,4-糖苷键的酶的总称,又称为胞壁质酶,1921年,由苏格兰生物学家Fleming发现[1].溶菌酶是机体重要的先天性免疫物质,参与水解细菌的细胞壁,具有抑制外源微生物生长的作用;同时,它也是

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