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《福建农林大学学报(自然科学版)》 2017年01期
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一个新杉木纤维素合酶ClCesA基因的克隆与植物表达载体构建

魏晓骁  王士亚  陈潇潇  汪凤林  曹光球  曹世江  
【摘要】:为探索杉木木材形成的分子机制,以杉木嫩叶总RNA反转录的c DNA为模板,运用RT-PCR技术克隆出一个新杉木纤维素合酶基因ClCesA.该基因的开放阅读框(ORF)为2 955 bp,共编码984个氨基酸.通过TMHMM Server v.2.0和MEGA5.1软件预测ClCesA蛋白的跨膜结构和功能,发现该蛋白N端含有锌指结构,共有8个跨膜结构,平均跨膜区域18个氨基酸残基,并具有保守的DDDQXXLRW结构域.系统进化树分析结果表明,ClCesA可能与细胞次生壁形成有关.荧光定量PCR分析表明,ClCseA基因在杉木的不同器官(根、茎、叶)中均有表达,但在杉木根中的表达含量最高,茎中次之,叶中最低.随后,为后续该基因功能验证提供基础,将ClCesA克隆到含有GFP标签和潮霉素抗性的p GWB506载体,构建植物过表达载体p GWB506-35S-ClCesA-GFP.
【作者单位】福建农林大学林学院;国家林业局杉木工程技术研究中心;
【关键词】杉木 纤维素合酶 基因克隆 表达分析 载体构建
【基金】:福建农林大学校重点建设项目(6112C039B);福建农林大学林学院青年基金项目(k13xjj02a)
【分类号】:S791.27;Q943.2
【正文快照】:
纤维素作为地球上最丰富的可再生资源,是木材次生木质部细胞壁的主要组成成分之一,约占木材干重的40%,是决定木材品质的重要因子之一.为此揭示植物纤维素生物合成机制对木材材质改良、木材定向培育都具有十分重要的意义.纤维素合酶(Ces A)是纤维素生物合成的关键酶之一[1,2].

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