收藏本站
收藏 | 投稿 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

非洲猪瘟病毒p54抗原C端的原核表达及多克隆抗体的制备与鉴定

冯春燕  王彩霞  杜方原  张永宁  刘丹丹  林祥梅  吴绍强  
【摘要】:利用大肠埃希菌表达非洲猪瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55个氨基酸的肽段(命名为p54-2),制备了多克隆抗体并进行了纯化,以进一步用于非洲猪瘟ELISA试剂盒的研发。将PCR扩增获得的p54-2目的片段与表达载体pGEX6p-1质粒均经过限制性内切BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后,构建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表达质粒。将该质粒转化到大肠埃希菌BL21中,诱导蛋白大量表达,并纯化获得高纯度的蛋白。将纯化的p54-2蛋白免疫小鼠,获得p54-2多克隆抗体并进一步纯化多抗。用ELISA、Western blot对纯化的多克隆抗体进行效价滴定及特异性鉴定。结果显示,成功构建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重组质粒,在大肠埃希菌中IPTG诱导下,能够高效表达重组p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠获得的多克隆抗体经ELISA检测其抗体效价为1∶128 000,说明该蛋白有很好的免疫原性。Western blot结果显示,制备的多克隆抗体能特异性识别非洲猪瘟病毒p54胞内区,具有较高反应性和特异性,可以用于ELISA检测方法研究和p54抗原表位的鉴定。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前14条
1 周琳;李职;陈静波;谭跃德;;如何通过饲料生产防控非洲猪瘟病毒[J];养猪;2019年02期
2 ;关于非洲猪瘟和经典猪瘟病毒污染饲料的十个常见问题[J];北方牧业;2018年24期
3 庄金秋;梅建国;谢金文;李峰;沈志强;;非洲猪瘟病毒实验室检测方法研究进展[J];饲料与畜牧;2017年22期
4 孙怀昌;张鑫宇;张泉;;非洲猪瘟病毒特点及扬州大学对其研究简介[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2018年03期
5 ;非洲猪瘟病毒研究获进展[J];现代畜牧兽医;2019年03期
6 孙怀昌;;非洲猪瘟病毒研究进展[J];中国预防兽医学报;2006年01期
7 林彦星;曹琛福;杨俊兴;阮周曦;吴江;吕建强;花群义;;非洲猪瘟病毒实验室诊断方法的研究进展[J];中国兽医学报;2018年10期
8 贾良梁;夏俊花;Vienna R.Brown;Sarah N.Bevins;;非洲猪瘟病毒特性和临床症状[J];国外畜牧学(猪与禽);2018年12期
9 冯春燕;宋晓晖;仇松寅;王淑娟;王彩霞;张永宁;邓俊花;吴绍强;林祥梅;;非洲猪瘟病毒p54蛋白的表达及单抗制备[J];中国动物检疫;2016年05期
10 曹琛福;梁云浩;陶虹;花群义;曾少灵;杨俊兴;陈兵;张桂红;吕建强;;非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立[J];动物医学进展;2014年02期
11 ;政务[J];广东饲料;2019年02期
12 王建华;陈小金;赵丹;王玉玲;张俊哲;肖妍;董志珍;赵祥平;;非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J];中国预防兽医学报;2017年11期
13 曹琛福;梁云浩;花群俊;吕建强;孙洁;廖立珊;唐金明;张彩虹;杨俊兴;张桂红;;非洲猪瘟病毒p54蛋白抗原表位预测及鉴定[J];中国预防兽医学报;2014年11期
14 陈轶;王君玮;曹金山;邹艳丽;吴晓东;;非洲猪瘟病原学及单克隆抗体制备技术研究进展[J];畜牧与饲料科学;2012年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 曹琛福;基于非洲猪瘟病毒P54蛋白抗原表位的ELISA检测方法建立及应用[D];华南农业大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 邬旭龙;快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增方法的建立[D];四川农业大学;2014年
2 冯尧;非洲猪瘟病毒p54重组蛋白的原核表达及其单克隆抗体制备[D];扬州大学;2014年
3 李秋霞;非洲猪瘟病毒VP73基因和主要抗原表位区的原核表达及其ELISA检测方法的建立[D];西北农林科技大学;2010年
4 何玲玲;人巨细胞病毒UL146基因编码蛋白vCXCL-1的重组表达及其多克隆抗体的制备和鉴定[D];暨南大学;2018年
5 王晶;小G蛋白BBS3b的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备[D];天津科技大学;2018年
6 刘波;非洲猪瘟病毒K205R基因的原核表达及金标试纸的初步研制[D];四川农业大学;2014年
7 梁云浩;非洲猪瘟病毒蛋白p54原核真核表达、间接ELISA检测方法建立及单克隆抗体制备[D];暨南大学;2014年
8 吴海涛;非洲猪瘟病毒胶体金免疫层析试纸条的研制[D];扬州大学;2015年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 本报记者 张佳星;非洲猪瘟病毒里基因“针线”绣功了得[N];科技日报;2019年
2 记者 李晨 通讯员 柳金雄;我国第一株非洲猪瘟病毒成功分离[N];中国科学报;2019年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978